發(fā)布時(shí)間：2022-04-26 18:51

　　目的:分析富含AT序列的特異性核基質(zhì)區(qū)結(jié)合蛋白1（SATB1）表達(dá)改變對(duì)人鼻咽癌（NPC）細(xì)胞中蛋白表達(dá)譜特征的影響,并采用生物信息學(xué)富集分析差異信號(hào)通路。方法:利用SATB1過(guò)表達(dá)慢病毒和陰性對(duì)照慢病毒感染CNE1細(xì)胞,獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。提取2組細(xì)胞的總蛋白,利用TMT標(biāo)記蛋白定量技術(shù)和串聯(lián)質(zhì)譜分析技術(shù)篩選出差異表達(dá)蛋白,采用RT-qPCR對(duì)差異蛋白編碼基因在mRNA水平進(jìn)行定量驗(yàn)證;應(yīng)用GO數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行注釋和富集分析,應(yīng)用KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異蛋白涉及信號(hào)通路進(jìn)行富集分析。結(jié)果:SATB1過(guò)表達(dá)慢病毒感染CNE1細(xì)胞后獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。與對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)SATB1的CNE1細(xì)胞鑒別出278個(gè)差異表達(dá)蛋白,其中115個(gè)表達(dá)上調(diào),163個(gè)表達(dá)下調(diào);采用RT-qPCR對(duì)10個(gè)代表性差異蛋白的編碼基因進(jìn)行mRNA水平的驗(yàn)證,其結(jié)果與蛋白組學(xué)結(jié)果具有一致性。GO數(shù)據(jù)庫(kù)分析差異表達(dá)蛋白主要參與了細(xì)胞過(guò)程、單有機(jī)體過(guò)程、生物調(diào)控和代謝過(guò)程,發(fā)揮生物分子結(jié)合和催化等分子功能;細(xì)胞組件主要存在于細(xì)胞部分、細(xì)胞以及細(xì)胞器上。KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示差異表達(dá)蛋白參與和腫瘤關(guān)系密切的信號(hào)通路... 

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
材 料 和 方 法
    1 細(xì)胞系、主要試劑及儀器
    2 方法
        2.1 SATB1穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.2 樣本處理和收集
        2.3 濾膜輔助蛋白酶解法酶解蛋白
        2.4 TMT標(biāo)記
        2.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜
        2.6 Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.7 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)
    3 數(shù)據(jù)處理與分析
結(jié) 果
    1 成功構(gòu)建SATB1過(guò)表達(dá)CNE1細(xì)胞系
    2 蛋白樣本質(zhì)控
    3 差異表達(dá)蛋白的鑒定和篩選
    4 差異表達(dá)蛋白的驗(yàn)證
    5 GO(gene oncology)注釋及富集分析
    6 KEGG通路注釋及富集分析
討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建SETD2基因敲除鼻咽癌細(xì)胞株并分析其增殖特性[J]. 王思思,廖曉敏,邵鐘銘,袁建玲,封慕茵,哈艷平,李汝佳,申志華,揭偉.  中國(guó)病理生理雜志. 2018(12)
[2]SATB1高表達(dá)通過(guò)促進(jìn)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化而介導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移[J]. 賈亞楠,王可可,王思思,廖曉敏,封慕茵,袁建玲,邵鐘銘,揭偉,申志華.  中國(guó)病理生理雜志. 2018(09)
[3]SATB1在鼻咽癌中的表達(dá)及意義[J]. 潘志勇,鄧燕飛,周冬妮,殷平.  齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2011(22)



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