目的:分析富含AT序列的特異性核基質區(qū)結合蛋白1（SATB1）表達改變對人鼻咽癌（NPC）細胞中蛋白表達譜特征的影響,并采用生物信息學富集分析差異信號通路。方法:利用SATB1過表達慢病毒和陰性對照慢病毒感染CNE1細胞,獲得穩(wěn)定表達細胞系。提取2組細胞的總蛋白,利用TMT標記蛋白定量技術和串聯(lián)質譜分析技術篩選出差異表達蛋白,采用RT-qPCR對差異蛋白編碼基因在mRNA水平進行定量驗證;應用GO數(shù)據(jù)庫對差異表達蛋白進行注釋和富集分析,應用KEGG數(shù)據(jù)庫對差異蛋白涉及信號通路進行富集分析。結果:SATB1過表達慢病毒感染CNE1細胞后獲得穩(wěn)定表達細胞系。與對照組相比,過表達SATB1的CNE1細胞鑒別出278個差異表達蛋白,其中115個表達上調,163個表達下調;采用RT-qPCR對10個代表性差異蛋白的編碼基因進行mRNA水平的驗證,其結果與蛋白組學結果具有一致性。GO數(shù)據(jù)庫分析差異表達蛋白主要參與了細胞過程、單有機體過程、生物調控和代謝過程,發(fā)揮生物分子結合和催化等分子功能;細胞組件主要存在于細胞部分、細胞以及細胞器上。KEGG數(shù)據(jù)庫分析顯示差異表達蛋白參與和腫瘤關系密切的信號通路... 

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【文章目錄】：
材 料 和 方 法
    1 細胞系、主要試劑及儀器
    2 方法
        2.1 SATB1穩(wěn)定表達細胞系的構建
        2.2 樣本處理和收集
        2.3 濾膜輔助蛋白酶解法酶解蛋白
        2.4 TMT標記
        2.5 液相色譜-串聯(lián)質譜
        2.6 Western blot實驗
        2.7 RT-qPCR實驗
    3 數(shù)據(jù)處理與分析
結 果
    1 成功構建SATB1過表達CNE1細胞系
    2 蛋白樣本質控
    3 差異表達蛋白的鑒定和篩選
    4 差異表達蛋白的驗證
    5 GO(gene oncology)注釋及富集分析
    6 KEGG通路注釋及富集分析
討 論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于CRISPR/Cas9技術構建SETD2基因敲除鼻咽癌細胞株并分析其增殖特性[J]. 王思思,廖曉敏,邵鐘銘,袁建玲,封慕茵,哈艷平,李汝佳,申志華,揭偉.  中國病理生理雜志. 2018(12)
[2]SATB1高表達通過促進上皮-間充質轉化而介導鼻咽癌細胞侵襲和轉移[J]. 賈亞楠,王可可,王思思,廖曉敏,封慕茵,袁建玲,邵鐘銘,揭偉,申志華.  中國病理生理雜志. 2018(09)
[3]SATB1在鼻咽癌中的表達及意義[J]. 潘志勇,鄧燕飛,周冬妮,殷平.  齊齊哈爾醫(yī)學院學報. 2011(22)



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