發(fā)布時(shí)間：2022-01-21 12:21

　　目的:通過建立大鼠視神經(jīng)損傷模型,研究視神經(jīng)損傷后軸突中Jarid1b及H3K4me3的表達(dá)變化,以了解Jarid1b是否在視神經(jīng)損傷中發(fā)揮一定的作用;建立視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGCs）的原代培養(yǎng)模型,觀察光鏡下的細(xì)胞形態(tài),并對(duì)其純度進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定,為RGCs的生理功能或生物學(xué)特性研究提供一定的基礎(chǔ)。方法:1.選取清潔級(jí)成年SD大鼠15只,雌雄不限,每只大鼠均以左眼作為損傷眼,使用顯微血管夾在眼球后方約2mm處垂直視神經(jīng)鉗夾約15s,以損傷視神經(jīng);以右眼作為對(duì)照眼,暴露視神經(jīng)15s,不進(jìn)行損傷。損傷或暴露視神經(jīng)后對(duì)大鼠雙眼進(jìn)行眼部檢查和FVEP檢測(cè),并與損傷前的FVEP結(jié)果進(jìn)行對(duì)照,以確保視神經(jīng)損傷模型成功。在視神經(jīng)損傷后第3 d、7 d、14 d,分別隨機(jī)處死每組中的5只大鼠,取左眼和右眼視神經(jīng)組織制作病理切片分別作為急性損傷組和正常對(duì)照組。對(duì)切片進(jìn)行免疫組化染色后,計(jì)算兩組Jarid1b和H3K4me3的陽性表達(dá)率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.選取出生7d以內(nèi)的SD大鼠,麻醉后摘除眼球,分離出視網(wǎng)膜組織,用木瓜蛋白酶進(jìn)行充分消化,制成RGCs懸液,以兔抗大鼠巨噬細(xì)胞多克隆抗體、山羊... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

暴露視神經(jīng)組織

圖 1 暴露視神經(jīng)組織 圖 2 視神經(jīng)損傷后大鼠瞳孔散大2.2 視神經(jīng)組織病理切片（1）取材：在視神經(jīng)損傷后第 3d、7d、14d，分別隨機(jī)處死 5 只大鼠，切取其左眼及右眼視神經(jīng)組織各約 6mm。（2）固定：將視神經(jīng)組織標(biāo)本置于 10%甲醛溶液內(nèi)固定 24h。（3）脫水：將標(biāo)本置于 70%、80%、90%、95%的酒精溶液內(nèi)各 1h，無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ內(nèi)各 10min 進(jìn)行梯度脫水。（4）透明：將標(biāo)本置于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ內(nèi)各 15min。（5）包埋：將標(biāo)本置于 55℃融化狀態(tài)的石蠟中包埋 30min，之后冷卻凝固。（6）切片：將蠟塊做連續(xù)切片，片厚 3μm，40℃水浴。每個(gè)標(biāo)本各做兩張切片。用防脫片載玻片撈出切片，置于 64℃烤箱中烘烤 1h。2.3 免疫組化步驟（1）切片脫蠟、水化：將切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ內(nèi)各 10min，無水乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ內(nèi)各 5min、5min、5min，95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇、50%乙醇內(nèi)各 5min。用蒸餾水

圖 3 正常大鼠視神經(jīng) Jarid1b 表達(dá)（×200） 圖 4 損傷 3d 大鼠視神經(jīng) Jarid1b 表達(dá)（×200）圖 5 損傷 7d 大鼠視神經(jīng) Jarid1b 表達(dá)（×200） 圖 6 損傷 14d 大鼠視神經(jīng) Jarid1b 表達(dá)（×200）表 1 同組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn) Jarid1b 表達(dá)比較組別 正常對(duì)照組 急性損傷組3 天F 1.499F 590.2387 天

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3600250