目的:研究白細(xì)胞介素-36α（Interleukin 36 alpha,IL-36α）在真菌性角膜炎（fungal keratitis,FK）中的表達(dá)及其作用。方法:1、刮取真菌性角膜炎患者角膜上皮、角膜移植術(shù)后剩余的健康供體周邊角膜上皮,分別提取mRNA,實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)IL-36αmRNA表達(dá)。HE染色（Hematoxylin-Eosin Staining）觀察真菌性角膜炎患者角膜組織病理變化,并采用免疫組織化學(xué)染色法（Immunohistochemistry,IHC）檢測(cè)人角膜組織中IL-36α蛋白表達(dá)。煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus,AF）感染C57BL/6小鼠角膜建立真菌性角膜炎動(dòng)物模型,觀察感染1、3、5天小鼠角膜炎癥情況并記錄臨床評(píng)分,分別采用RT-PCR或蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測(cè)真菌感染組小鼠角膜和損傷對(duì)照組小鼠角膜中IL-36αm RNA或蛋白表達(dá),進(jìn)一步采用免疫熒光染色（I mmunofluorescence,IF）明確損傷對(duì)照組和感染3天小鼠角膜中IL-36α表達(dá)及定位。2、外源性IL-36α重... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

IL-36α在真菌性角膜炎中的表達(dá)正常人角膜上皮及真菌感染的人角膜上皮中IL-36αmRNA的表達(dá)（A）；正常人角膜組織和真菌感的人染角膜組織HE染色（B-C）（200×）；正常人角膜組織及真菌性角膜炎患者角膜組織中IL-36α蛋白免疫組化染色圖像（D-E）（200×），藍(lán)色：核染，褐色：IL-36α

∈蠼悄と彼鵯?延?希ㄍ?A）；與IgG+真菌刺激組（IgG+AF組）相比，rmIL-36α預(yù)處理后真菌刺激組（rmIL-36α+AF組）小鼠角膜角膜上皮潰瘍面積及深度、混濁程度均明顯加重，角鞏膜緣處可見(jiàn)大量新生血管（圖2B-C），臨床炎癥評(píng)分升高（9.0±0.6，p<0.001），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2D）。給予IgG或IL-36α重組蛋白進(jìn)行預(yù)處理后，檢測(cè)煙曲霉菌感染的小鼠角膜組織中中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況。MPO檢測(cè)結(jié)果顯示，rmIL-36α+AF組小鼠角膜中MPO水平較IgG+AF組顯著升高（2.49±0.42倍，p<0.001），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2E）。圖2.IL-36α對(duì)煙曲霉菌感染的C57BL/6小鼠角膜炎癥程度的影響IgG+損傷對(duì)照組、IgG+AF組、rmIL-36α+AF組小鼠感染后3天的角膜前節(jié)照片（A-C）。IgG+AF組、rmIL-36α+AF組臨床炎癥評(píng)分（D）、角膜組織MPO水平（E）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）3.IL-36α對(duì)小鼠煙曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影響IgG或IL-36α重組蛋白預(yù)處理小鼠角膜后建立小鼠煙曲霉菌性角膜炎感染模型，在感染后3天檢測(cè)角膜組織中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)變化。結(jié)果顯示，IgG+AF組角膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平較IgG+損傷對(duì)照組顯著升高（分別升高49.43±15.32倍，p<0.001；19.46±4.24倍，p<0.001；6.94±1.79倍，p<0.001），rmIL-36α+AF組小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)較IgG+AF組明顯增加（分別升高2.22±1.04倍，p<0.001；1.47±0.41倍，p<0.01；3.36±1.18倍，p<0.001），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3A-C）。同時(shí)，IgG+AF組中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平較IgG+損傷對(duì)照組明顯升高（分別升高1.97±0.06倍，p<0.001；1.51±0.02倍，p<0.001；1.30±0.05倍，p<0.001），

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文15rmIL-36α+AF組感染的小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)明顯高于IgG+AF組（分別升高1.14±0.03倍，p<0.01；1.36±0.04倍，p<0.001；1.49±0.10倍，p<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3D-G）。圖3.IL-36α對(duì)小鼠煙曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影響IgG+損傷對(duì)照組、IgG+AF組、rmIL-36α+AF組小鼠感染后3天角膜中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA（A-C）、蛋白表達(dá)（D）及灰度統(tǒng)計(jì)（E-G）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）4.IL-36α在小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞中表達(dá)及作用

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Corneal infection in Shandong peninsula of China: a10-year retrospective study on 578 cases[J]. Xiao-Jing Pan,Tao Jiang,Hai Zhu,Peng-Peng Liu,Zhan-Yu Zhou,Alexander J.Mao.  International Journal of Ophthalmology. 2016(01)



本文編號(hào)：3468784