目的:研究白細胞介素-36α（Interleukin 36 alpha,IL-36α）在真菌性角膜炎（fungal keratitis,FK）中的表達及其作用。方法:1、刮取真菌性角膜炎患者角膜上皮、角膜移植術(shù)后剩余的健康供體周邊角膜上皮,分別提取mRNA,實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測IL-36αmRNA表達。HE染色（Hematoxylin-Eosin Staining）觀察真菌性角膜炎患者角膜組織病理變化,并采用免疫組織化學(xué)染色法（Immunohistochemistry,IHC）檢測人角膜組織中IL-36α蛋白表達。煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus,AF）感染C57BL/6小鼠角膜建立真菌性角膜炎動物模型,觀察感染1、3、5天小鼠角膜炎癥情況并記錄臨床評分,分別采用RT-PCR或蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測真菌感染組小鼠角膜和損傷對照組小鼠角膜中IL-36αm RNA或蛋白表達,進一步采用免疫熒光染色（I mmunofluorescence,IF）明確損傷對照組和感染3天小鼠角膜中IL-36α表達及定位。2、外源性IL-36α重... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

IL-36α在真菌性角膜炎中的表達正常人角膜上皮及真菌感染的人角膜上皮中IL-36αmRNA的表達（A）；正常人角膜組織和真菌感的人染角膜組織HE染色（B-C）（200×）；正常人角膜組織及真菌性角膜炎患者角膜組織中IL-36α蛋白免疫組化染色圖像（D-E）（200×），藍色：核染，褐色：IL-36α

∈蠼悄と彼鵯?延?希ㄍ?A）；與IgG+真菌刺激組（IgG+AF組）相比，rmIL-36α預(yù)處理后真菌刺激組（rmIL-36α+AF組）小鼠角膜角膜上皮潰瘍面積及深度、混濁程度均明顯加重，角鞏膜緣處可見大量新生血管（圖2B-C），臨床炎癥評分升高（9.0±0.6，p<0.001），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（圖2D）。給予IgG或IL-36α重組蛋白進行預(yù)處理后，檢測煙曲霉菌感染的小鼠角膜組織中中性粒細胞及巨噬細胞浸潤情況。MPO檢測結(jié)果顯示，rmIL-36α+AF組小鼠角膜中MPO水平較IgG+AF組顯著升高（2.49±0.42倍，p<0.001），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（圖2E）。圖2.IL-36α對煙曲霉菌感染的C57BL/6小鼠角膜炎癥程度的影響IgG+損傷對照組、IgG+AF組、rmIL-36α+AF組小鼠感染后3天的角膜前節(jié)照片（A-C）。IgG+AF組、rmIL-36α+AF組臨床炎癥評分（D）、角膜組織MPO水平（E）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）3.IL-36α對小鼠煙曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影響IgG或IL-36α重組蛋白預(yù)處理小鼠角膜后建立小鼠煙曲霉菌性角膜炎感染模型，在感染后3天檢測角膜組織中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達變化。結(jié)果顯示，IgG+AF組角膜組織中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平較IgG+損傷對照組顯著升高（分別升高49.43±15.32倍，p<0.001；19.46±4.24倍，p<0.001；6.94±1.79倍，p<0.001），rmIL-36α+AF組小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達較IgG+AF組明顯增加（分別升高2.22±1.04倍，p<0.001；1.47±0.41倍，p<0.01；3.36±1.18倍，p<0.001），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（圖3A-C）。同時，IgG+AF組中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平較IgG+損傷對照組明顯升高（分別升高1.97±0.06倍，p<0.001；1.51±0.02倍，p<0.001；1.30±0.05倍，p<0.001），

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文15rmIL-36α+AF組感染的小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表達明顯高于IgG+AF組（分別升高1.14±0.03倍，p<0.01；1.36±0.04倍，p<0.001；1.49±0.10倍，p<0.01），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（圖3D-G）。圖3.IL-36α對小鼠煙曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影響IgG+損傷對照組、IgG+AF組、rmIL-36α+AF組小鼠感染后3天角膜中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA（A-C）、蛋白表達（D）及灰度統(tǒng)計（E-G）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）4.IL-36α在小鼠RAW264.7巨噬細胞中表達及作用

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Corneal infection in Shandong peninsula of China: a10-year retrospective study on 578 cases[J]. Xiao-Jing Pan,Tao Jiang,Hai Zhu,Peng-Peng Liu,Zhan-Yu Zhou,Alexander J.Mao.  International Journal of Ophthalmology. 2016(01)



本文編號：3468784