目的探討雷帕霉素在誘導(dǎo)人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞發(fā)生自噬過程中的作用及在此過程中FIP200基因的表達變化情況。方法應(yīng)用CCK-8法檢測不同濃度雷帕霉素處理CNE-1細(xì)胞4、12、24、48小時后對細(xì)胞增殖能力的影響;在激光共聚焦顯微鏡下觀察自噬小體形成過程中LC3顆粒的聚集情況;qRT-PCR及Western blot檢測雷帕霉素處理CNE-1細(xì)胞48小時后對LC3、p62及FIP200基因的表達水平的影響。結(jié)果 CNE-1細(xì)胞經(jīng)不同濃度雷帕霉素處理4小時,各組細(xì)胞的增殖能力無明顯差異（P>0.05）,在處理12小時后,雷帕霉素對CNE-1細(xì)胞增殖活性產(chǎn)生抑制作用,且呈濃度依賴性（P<0.01）;在激光共聚焦顯微鏡下可見細(xì)胞經(jīng)雷帕霉素處理48小時后出現(xiàn)較明顯的LC3顆粒聚集;CNE-1細(xì)胞中的自噬相關(guān)基因LC3、p62,在雷帕霉素處理48小時后,與對照組相比前者表達升高（P<0.01）,后者表達量降低（P<0.01）,FIP200基因表達水平升高（P<0.01）。結(jié)論雷帕霉素能抑制鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的增殖活性,誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬,FIP200可能在調(diào)控鼻咽癌... 

【文章來源】：中國耳鼻咽喉頭頸外科. 2020,27(10)CSCD

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【部分圖文】：

不同濃度雷帕霉素在不同時間點對CNE-1細(xì)胞增殖的影響

CNE-1細(xì)胞經(jīng)雷帕霉素處理不同時間后,由LC3-Ⅱ、p62、FIP200基因及內(nèi)參照基因U6的擴增曲線及熔解曲線,LC3-Ⅱ、p62、FIP200及U6的PCR擴增效率恒定,且均已到達平臺期,相應(yīng)的閾值循環(huán)數(shù)(cycle threshold,Ct)穩(wěn)定,重現(xiàn)性好;熔解曲線均為單峰特異,引物的特異性好且無引物二聚體產(chǎn)生。說明可以使用該體系對目的基因LC3-Ⅱ、p62、FIP200進行定量分析(圖4A～圖4H)。qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,14 μmol/L的雷帕霉素處理CNE-1細(xì)胞12、24、48小時后,LC3-Ⅱ mRNA及FIP200 mRNA表達水平隨著雷帕霉素作用時間的延長逐漸升高,而p62 mRNA的表達水平逐漸降低,與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=389.06、76.86、373.80,P<0.01)(圖4I～圖4K)。圖3 雷帕霉素處理不同時間后，A LC3、p62、FIP200及tubulin的Western blot檢測；B、C、D LC3-Ⅱ、p62、FIP200蛋白相對表達量，*與對照組（0 h）比較，P<0.05

圖2 雷帕霉素誘導(dǎo)LC3陽性光點表達變化情況。與對照組相比，雷帕霉素組的LC3紅色熒光增強且出現(xiàn)了聚集現(xiàn)象，雷帕霉素能增強LC3的表達圖4 LC3-Ⅱ、p62、FIP200和U6mRNA的qRT-PCR檢測。


本文編號：3447160