目的:通過構(gòu)建pVAX1-Der p2-A20真核表達(dá)載體,并經(jīng)聚乳酸-羥基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolic acid）,PLGA]包載為PLGA-pVAX1-Der p2-A20（PpDA）納米DNA疫苗,探討其對重組屋塵螨Der p2變應(yīng)原誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）模型小鼠的特異性免疫治療效果及其機(jī)制,為AR的治療策略提供新的思路。方法:（1）采用乳化溶液蒸發(fā)法制備PpDA,掃描電鏡觀察其形態(tài)學(xué)特點,體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗驗證其在細(xì)胞中的表達(dá)。（2）大量誘導(dǎo)表達(dá)、純化Der p2重組蛋白,采用ELISA和蛋白免疫印跡（Western blot）分析其免疫學(xué)特性。（3）50只健康雌性Balb/c小鼠,6-8W齡,隨機(jī)分為5組,正常組（NC）、模型組（AR）、納米疫苗治療組（PpDA）、空白納米治療組（PLGA）和裸質(zhì)粒pVAX1-Der p2-A20治療組（pDA）。AR組、PpDA組、PLGA組和pDA組分別在第0,7,14天經(jīng)腹腔注射100μg Der p2重組蛋白和15μg霍亂毒素（Cholera toxin,CT）進(jìn)行致敏... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pVAX1-Derp2-A20（pDA）的部分測序圖

重組質(zhì)粒 pVAX1-Der p2-A20（pDA）的部分測encing map of recombinant plasmid pVAX1-Der p2-征封的納米粒溶液外觀呈乳白色，均質(zhì)，半干燥后，為白色粉末，可溶于水，表明成功 SEM 下呈橢圓形、光滑的顆粒，外形完為（292±2.34）nm，結(jié)果見圖 2。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 胡文會3.2.3 PpmDA 的體外表達(dá)體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗結(jié)果如圖 3 所示，PpmDA轉(zhuǎn)染組和 pmDA 轉(zhuǎn)染組均能在激光共聚焦顯微鏡下檢測到熒光。然而，空白 PLGA 組和 NC 組中未檢測到熒光，表明質(zhì)粒 pDA 在經(jīng) PLGA 包封后可以在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，并保持其生物活性。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3421792