目的探討靶向P2X7受體（P2X7R）的小發(fā)夾RNA（shRNA）對(duì)人鼻咽癌HONE1細(xì)胞增殖、凋亡及信號(hào)通路的影響。方法根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)化shRNA轉(zhuǎn)染條件,將2條靶向抑制P2X7R基因的shRNA載體片段（shRNA-1、shRNA-2）分別高效轉(zhuǎn)染HONE1細(xì)胞,同時(shí)設(shè)轉(zhuǎn)染無(wú)義序列（Blank）的空轉(zhuǎn)染組及不進(jìn)行任何處理的對(duì)照組。分別于轉(zhuǎn)染24、48、72、96h后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QPCR）檢測(cè)P2X7R表達(dá)水平以篩選抑制率高的轉(zhuǎn)染載體用于后續(xù)試驗(yàn)。四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染48、96 h后的細(xì)胞凋亡率,QPCR法檢測(cè)各組凋亡相關(guān)基因的mRNA水平,Western blotting檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染96 h后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路和Wnt/β-連接素（β-catenin）通路中的蛋白變化。結(jié)果轉(zhuǎn)染組的P2X7R mRNA水平均低于空轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組（P<0.05）,且選擇干擾效率高的shRNA-1載體進(jìn)行功能學(xué)研究;與空轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組比較,shRNA-1轉(zhuǎn)染組的HON... 

【文章來(lái)源】：臨床腫瘤學(xué)雜志. 2016,21(09)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

shＲNA轉(zhuǎn)染對(duì)各組P2X7Ｒ表達(dá)的影響

A:對(duì)照組;B:空轉(zhuǎn)染組;C:shＲNA-1轉(zhuǎn)染組圖2P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染96h后各組HONE1細(xì)胞凋亡率的流式細(xì)胞圖表2P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染對(duì)HONE1細(xì)胞凋亡的影響(%)組別48h96h對(duì)照組4.55±1.126.71±1.24空轉(zhuǎn)染組3.29±0.845.36±1.75shＲNA-1轉(zhuǎn)染組24.37±2.93*#53.66±4.40*#注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與空轉(zhuǎn)染組比較，#P＜0.052.4shＲNA-1靶向沉默P2X7Ｒ對(duì)HONE1細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的影響與空轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組比較，HONE1細(xì)胞經(jīng)shＲNA-1轉(zhuǎn)染靶向沉默P2X7Ｒ表達(dá)后促凋亡基因表達(dá)升高，而抗凋亡基因表達(dá)降低;shＲNA-1轉(zhuǎn)染組48h的Bcl-2、Mcl-1mＲNA水平均降低，Bid、BaxmＲNA水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組Bcl-2、Mcl-1、Bid和BaxmＲNA水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見圖3。A:Bcl-2;B:Mcl-1;C:Bid;D:Bax;與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與空轉(zhuǎn)染組比較，#P＜0.05圖3QPCＲ檢測(cè)shＲNA-1轉(zhuǎn)染48h后各組凋亡相關(guān)基因的mＲNA水平2.5P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染對(duì)HONE1細(xì)胞相關(guān)通路蛋白的影響P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染可抑制HONE1細(xì)胞PI3K/Akt及Wnt/β-catenin通路的活化。與空轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組比較，shＲNA-1轉(zhuǎn)染組HONE1細(xì)胞的PTEN水平升高，而p-Akt、p-β-cate-nin、CyclinD1及C-myc水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見圖4。3討論配體門控離子通道P2X7Ｒ是近年來(lái)研究非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)靶向藥物方面的熱點(diǎn)之一，它是P2XＲ家族中獨(dú)特的一員，三磷酸腺苷是其天然配·772·臨床腫瘤學(xué)雜志2016年9月第21卷第9期ChineseClinicalOncology，Sep．2016，Vol．21，No．9

A:對(duì)照組;B:空轉(zhuǎn)染組;C:shＲNA-1轉(zhuǎn)染組圖2P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染96h后各組HONE1細(xì)胞凋亡率的流式細(xì)胞圖表2P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染對(duì)HONE1細(xì)胞凋亡的影響(%)組別48h96h對(duì)照組4.55±1.126.71±1.24空轉(zhuǎn)染組3.29±0.845.36±1.75shＲNA-1轉(zhuǎn)染組24.37±2.93*#53.66±4.40*#注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與空轉(zhuǎn)染組比較，#P＜0.052.4shＲNA-1靶向沉默P2X7Ｒ對(duì)HONE1細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的影響與空轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組比較，HONE1細(xì)胞經(jīng)shＲNA-1轉(zhuǎn)染靶向沉默P2X7Ｒ表達(dá)后促凋亡基因表達(dá)升高，而抗凋亡基因表達(dá)降低;shＲNA-1轉(zhuǎn)染組48h的Bcl-2、Mcl-1mＲNA水平均降低，Bid、BaxmＲNA水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組Bcl-2、Mcl-1、Bid和BaxmＲNA水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見圖3。A:Bcl-2;B:Mcl-1;C:Bid;D:Bax;與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與空轉(zhuǎn)染組比較，#P＜0.05圖3QPCＲ檢測(cè)shＲNA-1轉(zhuǎn)染48h后各組凋亡相關(guān)基因的mＲNA水平2.5P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染對(duì)HONE1細(xì)胞相關(guān)通路蛋白的影響P2X7ＲshＲNA-1轉(zhuǎn)染可抑制HONE1細(xì)胞PI3K/Akt及Wnt/β-catenin通路的活化。與空轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組比較，shＲNA-1轉(zhuǎn)染組HONE1細(xì)胞的PTEN水平升高，而p-Akt、p-β-cate-nin、CyclinD1及C-myc水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見圖4。3討論配體門控離子通道P2X7Ｒ是近年來(lái)研究非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)靶向藥物方面的熱點(diǎn)之一，它是P2XＲ家族中獨(dú)特的一員，三磷酸腺苷是其天然配·772·臨床腫瘤學(xué)雜志2016年9月第21卷第9期ChineseClinicalOncology，Sep．2016，Vol．21，No．9

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RNA干擾Dub3表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 崔巍,丁振,谷振芳,王軍業(yè).  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2015(11)
[2]鼻咽癌和肝癌聯(lián)合篩查的流行病學(xué)及衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)研究[J]. 全文,俞霞,吳標(biāo)華,季明芳.  中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版). 2014(04)



本文編號(hào)：3352356