目的探討LXR-SIRT1調(diào)控軸在淀粉樣β（amyloidβ, Aβ）誘導的視網(wǎng)膜上皮（retinal pigment epithelial, RPE）細胞炎癥和凋亡中的作用。方法體外培養(yǎng)ARPE-19細胞系,收集濕性年齡相關(guān)性黃斑變性（age-related macular degeneration,AMD）患者和正常受試者的人外周血單個核細胞（human peripheral blood mononuclear cell, PBMC）并檢測其中沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silencing information regulator 1, SIRT1）的mRNA表達。用1.0、5.0μmol/L的Aβ1-40和5.0μmol/L Aβ40-1處理ARPE-19細胞24 h,Real-time PCR檢測SIRT1、IL-1β、p21在ARPE-19細胞中的表達,探討Aβ對ARPE-19細胞炎癥、凋亡的影響。用5.0μmol/L Aβ1-40和5.0μmol/L TO90處理ARPE-19細胞,Western blot檢測SIRT1、LXRα、ace-NF-κB、NF-κB、ace-p53、... 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學學報. 2020,42(14)北大核心CSCD

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免疫熒光和Western blot檢測ARPE-19細胞中RPE65和ZO-1的表達

圖1 免疫熒光和Western blot檢測ARPE-19細胞中RPE65和ZO-1的表達2.3 Aβ1-40對SIRT1、p21和IL-1β mRNA表達的影響

CCK-8檢測結(jié)果顯示:相對于未處理組,陰性對照(NC)組細胞增殖活力降低。此外,與NC組比較,iSIRT1組細胞增殖活力進一步降低(P<0.01,圖6A)。Real-time PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示:與未處理組和NC組相比,iSIRT1組SIRT1的表達降低(P<0.01,圖6B～D)。表明病毒轉(zhuǎn)染本身不影響SIRT1的表達,iSIRT1成功降低了SIRT1的表達。圖4 RT-PCR和Western blot檢測TO90預處理及Aβ1-40刺激對ARPE-19細胞SIRT1和LXRα表達的影響


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