DNMT1蛋白通過沉默MEG3基因促進(jìn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤增殖
發(fā)布時間：2021-06-16 10:23
目的探討DNMT1蛋白是否通過沉默MEG3基因誘導(dǎo)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤增殖。方法通過轉(zhuǎn)染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上調(diào)或干擾DNMT1的表達(dá)水平;通過轉(zhuǎn)染pcDNA-MEG3或si-MEG3上調(diào)或干擾MEG3的表達(dá)水平;用Western blot檢測視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中DNMT1蛋白表達(dá)量;用CCK-8法及EdU法檢測細(xì)胞的增殖能力;用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞中MEG3表達(dá)量的變化;干擾DNMT1表達(dá)后,用甲基化特異性PCR檢測MEG3基因啟動子DNA甲基化水平的變化。結(jié)果視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤SO-RB50及HXO-RB44細(xì)胞中DNMT1蛋白表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。轉(zhuǎn)染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44細(xì)胞中DNMT1蛋白表達(dá)增加,細(xì)胞增殖能力增加,MEG3表達(dá)量降低;轉(zhuǎn)染了siRNADNMT1的SO-RB50細(xì)胞DNMT1蛋白表達(dá)減少,細(xì)胞增殖能力降低,MEG3表達(dá)量增加（P<0.05）。干擾DNMT1蛋白表達(dá)后,MEG3基因啟動子DNA甲基化水平降低（P<0.05）。逆轉(zhuǎn)DNMT1蛋白對MEG3基因的調(diào)控后,DNM...
【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,40(09)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：7 頁
【部分圖文】：
DNMT1蛋白通過MEG3調(diào)控RB細(xì)胞增殖
CCK-8實驗顯示，轉(zhuǎn)染了pc DNA-DNMT1的HXO-RB44細(xì)胞，72 h后相對細(xì)胞數(shù)量高于對照組1(P<0.05，圖2C）；轉(zhuǎn)染了si-DNMT1的SO-RB50細(xì)胞，72 h后相對細(xì)胞數(shù)量低于對照組2(P<0.05，圖2C）。Ed U細(xì)胞增殖實驗顯示，pc DNA-DNMT1組Ed U陽性的HXO-RB44細(xì)胞比例高于對照組1(P<0.05，圖2D);si-DNMT1組Ed U陽性的SO-RB50細(xì)胞比例低于對照組2(P<0.05，圖2D）。
MEG3是第一個被發(fā)現(xiàn)具有腫瘤抑制功能的lnc RNA[17]，其在多種腫瘤中低表達(dá)，發(fā)揮著抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的抑癌作用[18-24]。然而MEG3在RB中的作用仍不清楚。我們既往研究證實，MEG3作為一種抑癌基因，在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞中亦處于失活狀態(tài)，并發(fā)揮著促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖的作用[26-28]。而MEG3的低表達(dá)與DNA過甲基化密切相關(guān)，有研究發(fā)現(xiàn)MEG3在腦膜瘤組織中低表達(dá)，其啟動子DNA甲基化的程度與腫瘤的侵襲生長有關(guān)[29-30]。有研究發(fā)現(xiàn)在人類無功能性垂體腺瘤中MEG3表達(dá)缺失，MEG3基因啟動子的過甲基化狀態(tài)與其表達(dá)缺失密切相關(guān)。Braconi等[31]在肝癌細(xì)胞中miR-29a可以通過下調(diào)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1和3，降低MEG3基因啟動子甲基化水平，進(jìn)而促使MEG3表達(dá)增加。上述研究證實，在多種腫瘤中DNA過甲基化均可導(dǎo)致MEG3失活。然而在RB中MEG3基因啟動子是否存在異常甲基化尚不清楚，因此在既往研究中，我們首先利用MS-PCR證實在RB腫瘤組織及細(xì)胞系中，MEG3基因啟動子均處于甲基化狀態(tài)；進(jìn)一步用不同濃度的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR處理RB細(xì)胞，然后利用qRT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞中MEG3表達(dá)水平的變化，結(jié)果表明，在RB中MEG3基因的表達(dá)水平與其DNA甲基化水平呈顯著負(fù)相關(guān)[25]。然而MEG3基因啟動子異常甲基化的機(jī)制尚不清楚，本研究擬進(jìn)一步對其進(jìn)行探討。圖4 DNMT1蛋白通過MEG3調(diào)控RB細(xì)胞增殖
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]lncRNA-MEG3通過P53途徑介導(dǎo)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤凋亡[J]. 高亞莉,陸曉和. 眼科新進(jìn)展. 2017(04)
[2]MEG3抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖[J]. 高亞莉,李勁. 腫瘤. 2016(03)
本文編號：3232901
【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,40(09)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：7 頁
【部分圖文】：
DNMT1蛋白通過MEG3調(diào)控RB細(xì)胞增殖
CCK-8實驗顯示，轉(zhuǎn)染了pc DNA-DNMT1的HXO-RB44細(xì)胞，72 h后相對細(xì)胞數(shù)量高于對照組1(P<0.05，圖2C）；轉(zhuǎn)染了si-DNMT1的SO-RB50細(xì)胞，72 h后相對細(xì)胞數(shù)量低于對照組2(P<0.05，圖2C）。Ed U細(xì)胞增殖實驗顯示，pc DNA-DNMT1組Ed U陽性的HXO-RB44細(xì)胞比例高于對照組1(P<0.05，圖2D);si-DNMT1組Ed U陽性的SO-RB50細(xì)胞比例低于對照組2(P<0.05，圖2D）。
MEG3是第一個被發(fā)現(xiàn)具有腫瘤抑制功能的lnc RNA[17]，其在多種腫瘤中低表達(dá)，發(fā)揮著抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的抑癌作用[18-24]。然而MEG3在RB中的作用仍不清楚。我們既往研究證實，MEG3作為一種抑癌基因，在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞中亦處于失活狀態(tài)，并發(fā)揮著促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖的作用[26-28]。而MEG3的低表達(dá)與DNA過甲基化密切相關(guān)，有研究發(fā)現(xiàn)MEG3在腦膜瘤組織中低表達(dá)，其啟動子DNA甲基化的程度與腫瘤的侵襲生長有關(guān)[29-30]。有研究發(fā)現(xiàn)在人類無功能性垂體腺瘤中MEG3表達(dá)缺失，MEG3基因啟動子的過甲基化狀態(tài)與其表達(dá)缺失密切相關(guān)。Braconi等[31]在肝癌細(xì)胞中miR-29a可以通過下調(diào)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1和3，降低MEG3基因啟動子甲基化水平，進(jìn)而促使MEG3表達(dá)增加。上述研究證實，在多種腫瘤中DNA過甲基化均可導(dǎo)致MEG3失活。然而在RB中MEG3基因啟動子是否存在異常甲基化尚不清楚，因此在既往研究中，我們首先利用MS-PCR證實在RB腫瘤組織及細(xì)胞系中，MEG3基因啟動子均處于甲基化狀態(tài)；進(jìn)一步用不同濃度的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR處理RB細(xì)胞，然后利用qRT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞中MEG3表達(dá)水平的變化，結(jié)果表明，在RB中MEG3基因的表達(dá)水平與其DNA甲基化水平呈顯著負(fù)相關(guān)[25]。然而MEG3基因啟動子異常甲基化的機(jī)制尚不清楚，本研究擬進(jìn)一步對其進(jìn)行探討。圖4 DNMT1蛋白通過MEG3調(diào)控RB細(xì)胞增殖
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]lncRNA-MEG3通過P53途徑介導(dǎo)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤凋亡[J]. 高亞莉,陸曉和. 眼科新進(jìn)展. 2017(04)
[2]MEG3抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖[J]. 高亞莉,李勁. 腫瘤. 2016(03)
本文編號：3232901
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/wuguanyixuelunwen/3232901.html
最近更新
教材專著
