目的探究體外將人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（hiPSCs）定向分化成視網(wǎng)膜類器官（ROs）的進(jìn)程并進(jìn)行小鼠在體細(xì)胞移植。方法使用定向分化培養(yǎng)基使BC1-eGFP hiPSCs懸浮培養(yǎng)得到神經(jīng)球,培養(yǎng)第7天時(shí)將神經(jīng)球貼壁培養(yǎng)誘導(dǎo)出神經(jīng)視網(wǎng)膜上皮結(jié)構(gòu),然后人工分離類視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)懸浮培養(yǎng),進(jìn)一步定向誘導(dǎo)分化得到成熟的ROs。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)培養(yǎng)第0、7、15、21和30周標(biāo)志基因的表達(dá)水平變化,采用免疫熒光染色法檢測(cè)培養(yǎng)第8天、第15天、第15周、第21周和第30周標(biāo)志基因的蛋白水平變化來鑒定誘導(dǎo)分化進(jìn)程及效果。在體移植ROs實(shí)驗(yàn)中,首先破壞外界膜,然后將經(jīng)消化的RO細(xì)胞懸液從角鞏膜緣注射到Gnat1-/-小鼠視網(wǎng)膜下腔,細(xì)胞移植后5個(gè)月進(jìn)行視網(wǎng)膜切片的免疫熒光染色檢測(cè)植入細(xì)胞的存活情況、與宿主視網(wǎng)膜的整合以及進(jìn)一步的成熟分化情況。結(jié)果形態(tài)學(xué)和免疫熒光染色結(jié)果顯示,體外誘導(dǎo)hiPSCs早期形成的眼區(qū)細(xì)胞高表達(dá)神經(jīng)視網(wǎng)膜上皮特異性標(biāo)志物PAX6和SOX1,隨后細(xì)胞可以表達(dá)視網(wǎng)膜祖細(xì)胞特異性標(biāo)志物L(fēng)HX2,集落外圈逐漸形成圓形透明馬蹄狀的類視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)。機(jī)械分離并懸浮培養(yǎng)得到的ROs直徑約為1 mm,... 

【文章來源】：中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志. 2020,38(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁


本文編號(hào)：3170118