本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)高糖環(huán)境中恒河猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(h UCMSCs)對(duì)高糖培養(yǎng)的恒河猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(RF/6A)的影響及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,旨在為減輕早期DR微血管的損害及視網(wǎng)膜毛細(xì)血管血-視網(wǎng)膜屏障的損傷,延緩DR的進(jìn)展。方法:本研究分為三組,即RF/6A空白對(duì)照組、高糖RF/6A組、h UCMSCs與高糖RF/6A共培養(yǎng)組。1、培養(yǎng)RF/6A細(xì)胞,利用復(fù)合培養(yǎng)體系(Transwell培養(yǎng)板)將h UCMSCs細(xì)胞加入Transwell系統(tǒng)的上層小室,下室加入含有25mmol/L的葡萄糖及RF/6A;將h UCMSCs按照1∶1比例與RF/6A共培養(yǎng)。培養(yǎng)液上下層小室中的大分子蛋白可以相互交流而細(xì)胞之間不互相接觸,隔膜的孔徑為0.4μm。2、采用MTT法測(cè)定各組RF/6A的細(xì)胞活力。計(jì)算不同條件作用后的細(xì)胞活力,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。計(jì)算公式:細(xì)胞活力(存活率)=實(shí)驗(yàn)組A值/正常組A值x100%。3、采用細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞的遷移能力,檢測(cè)h UCMSCs對(duì)高糖環(huán)境中RF/6A細(xì)胞遷移能力的影響。4、采用細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞的粘附能力。粘附率=(實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值-1)x100%。5、采用Matrigel基質(zhì)膠實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞的管腔形成能力,檢測(cè)h UCMSCs對(duì)高糖環(huán)境中RF/6A細(xì)胞管腔形成能力的影響。6、采用Western blot檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組Foxp3的蛋白表達(dá)量。7、采用酶聯(lián)免疫吸附法,檢測(cè)各組培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-17和ICAM-1的濃度。結(jié)果:1、成功建立h UCMSCs與RF/6A在高糖環(huán)境中共培養(yǎng)體系。2、MTT比色法測(cè)定高糖培養(yǎng)對(duì)RF/6A細(xì)胞活力的影響,三組行單因素方差分析進(jìn)行比較,第1d時(shí),三組細(xì)胞的存活率差異沒有顯著性(F=0.03,P0.05)。第3、7d時(shí),高糖組與高糖共培養(yǎng)組的細(xì)胞存活率相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�？梢哉J(rèn)為高糖可以降低RF/6A的細(xì)胞活力,抑制細(xì)胞增殖,而h UMSCs可以明顯地提高高糖環(huán)境中RF/6A的細(xì)胞活力。3、細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究RF/6A細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果表明:三組行單因素方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=189.7、369.4,p0.05),經(jīng)LSD-t檢驗(yàn),與高糖共培養(yǎng)組相比,高糖組顯著抑制RF/6A細(xì)胞的遷移(p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)測(cè)定高糖環(huán)境對(duì)RF/6A粘附能力的影響,結(jié)果顯示三組行單因素方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=160.7,p0.05),經(jīng)LSD-t檢驗(yàn),高糖共培養(yǎng)組與對(duì)照組相比,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),高糖共培養(yǎng)組高糖組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),提示高糖環(huán)境可以降低RF/6A細(xì)胞的粘附能力,h UMSCs可以增加高糖環(huán)境中RF/6A細(xì)胞的粘附能力。5、細(xì)胞管腔形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三組行單因素方差分析,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=113.60、350.71,p0.05),與對(duì)照組相比,高糖組能抑制RF/6A的細(xì)胞管腔形成,抑制率為:2d 55.36%、1w 76.71%;高糖共培養(yǎng)組與對(duì)照組的血管腔形成相比較,抑制率為:2d 17.01%、1w 12.61%,與高糖組相比,高糖共培養(yǎng)組血管腔數(shù)目是其1.86倍(2d)、3.75倍(1w)。6、Western blot檢測(cè)Foxp3蛋白表達(dá)。高糖培養(yǎng)1w后,foxp3蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比出現(xiàn)明顯下降,而與h UCMSCs共培養(yǎng)組的foxp3蛋白表達(dá)明顯較高糖組多(p0.05)。7、酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定對(duì)照組、高糖組和高糖共培養(yǎng)組各自收集的培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-17、ICAM-1的濃度。高糖組、高糖共培養(yǎng)組與對(duì)照組比較,上清液中IL-1β、IL-17、ICAM-1的濃度明顯升高,差異具有顯著性(p0.05)。結(jié)論高糖可以明顯抑制RF/6A細(xì)胞的增殖、遷移、粘附、管腔形成能力,h UCMSCs能夠增加RF/6A的增殖、遷移、粘附、管腔形成等細(xì)胞生物學(xué)能力,推測(cè)h UCMSCs通過調(diào)控Treg/Th17細(xì)胞表達(dá)平衡修復(fù)RF/6A細(xì)胞,對(duì)早期糖尿病視網(wǎng)膜病變具有免疫調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：恒河猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 共培養(yǎng) 糖尿病視網(wǎng)膜病變 干細(xì)胞治療
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R774.1;R587.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、hUMSCs對(duì)高糖環(huán)境中RF/6A細(xì)胞生物學(xué)影響15-31
• 1.1 對(duì)象和方法15-21
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞15
• 1.1.2 主要試劑15
• 1.1.3 主要儀器材料15-16
• 1.1.4 主要溶液的配置16-17
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 1.2 結(jié)果21-26
• 1.2.1 RF/6A細(xì)胞和hUCMSCs的形態(tài)21-22
• 1.2.2 hUCMSCs與高糖RF/6A共培養(yǎng)模型的建立22
• 1.2.3 MTT法檢測(cè)共培養(yǎng)后RF/6A細(xì)胞活力22-23
• 1.2.4 細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-24
• 1.2.5 細(xì)胞黏附能力的測(cè)定24-25
• 1.2.6 細(xì)胞管腔形成能力的測(cè)定25-26
• 1.3 討論26-29
• 1.3.1 高糖對(duì)猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)的影響26-27
• 1.3.2 MSCs對(duì)高糖環(huán)境中RF/6A細(xì)胞的影響27-28
• 1.3.3 MSCs干預(yù)早期DR的實(shí)驗(yàn)研究28
• 1.3.4 hUCMSCs干預(yù)早期DR的可能機(jī)制28-29
• 1.4 小結(jié)29-31
• 二、hUCMSCs對(duì)高糖環(huán)境中RF/6A細(xì)胞因子影響31-42
• 2.1 對(duì)象和方法31-34
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞31
• 2.1.2 主要試劑及器械31
• 2.1.3 其他試劑及器械31
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法31-34
• 2.2 結(jié)果34-36
• 2.2.1 Western blot檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組Foxp3的表達(dá)量34-35
• 2.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定三組各自收集的培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-17、ICAM-1 的濃度35-36
• 2.3 討論36-41
• 2.3.1 IL-1β 與DR的研究36-37
• 2.3.2 ICAM-1 與DR的研究37-38
• 2.3.3 Treg/Th17失衡與DR可能機(jī)制的研究38-41
• 2.4 小結(jié)41-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞治療早期糖尿病視網(wǎng)膜病變的研究進(jìn)展54-64
• 綜述參考文獻(xiàn)58-64
• 致謝64-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65

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6 馮月蘭;徐國(guó)興;謝茂松;;視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)上清液聯(lián)合視黃酸對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用[J];海峽科學(xué);2010年05期

7 張瑾;張子琦;張滟;許珉;;微囊化軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外定向分化[J];中國(guó)組織工程研究;2014年30期

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本文編號(hào)：304630