本文關(guān)鍵詞：骨肉瘤細(xì)胞CD44v2、CD44v5及CD44v6的表達(dá)及與細(xì)胞增殖、遷移的關(guān)系

  更多相關(guān)文章： 骨肉瘤 CD44v2 CD44v5 CD44v6 生長(zhǎng)曲線 細(xì)胞周期 劃痕實(shí)驗(yàn) 熒光定量PCR

【摘要】：目的:CD44變異體包括CD44v1、v2、v3、v4、v5、v6、v7、v8、v9、v10等,CD44變異體在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)具有組織特異性。目前人們認(rèn)為骨腫瘤表達(dá)與CD44各變異體的表達(dá)緊密相關(guān),并認(rèn)為CD44變異體的表達(dá)與骨肉瘤惡性程度、侵襲、轉(zhuǎn)移等有關(guān)。有國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)研究觀察了骨肉瘤中CD44v5、CD44v6的表達(dá),而CD44v2與骨肉瘤的關(guān)系并不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)q PCR技術(shù)及細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)3種不同的骨肉瘤細(xì)胞(MG-63、U-2OS、Saos-2)中變異體CD44v2、CD44v5及CD44v6的表達(dá)情況,以及通過(guò)生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞周期和劃痕實(shí)驗(yàn)判斷3種不同的骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移能力的差異。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行相關(guān)分析,探究這些變異體在不同骨肉瘤細(xì)胞表達(dá)分布,與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖以及遷移能力的關(guān)系。方法:1.應(yīng)用MTT法,在1-7天分別檢測(cè)U-2OS、MG-63、Saos-2骨肉瘤細(xì)胞活力,并依次繪制生長(zhǎng)曲線;2.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別測(cè)定U-2OS、MG-63、Saos-2細(xì)胞周期的變化;3.利用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察U-2OS、MG-63、Saos-2細(xì)胞遷移能力;4.分別提取U-2OS、MG-63、Saos-2細(xì)胞RNA,逆轉(zhuǎn)錄為c DNA,設(shè)計(jì)q PCR引物,應(yīng)用q PCR與熒光定量檢測(cè)3種骨肉瘤細(xì)胞CD44v2、CD44v5、CD44v6m RNA的表達(dá);5.應(yīng)用IDEAS軟件計(jì)算出各基因在各標(biāo)本中的CT值,以U-2OS作為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)用2-△△CT方法計(jì)算出各個(gè)基因在各標(biāo)本中表達(dá)的相對(duì)定量,用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)來(lái)表示各個(gè)基因在各組標(biāo)本中表達(dá)的相對(duì)定量值,進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果:1.依據(jù)生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示骨肉瘤細(xì)胞MG-63增殖能力,生長(zhǎng)速率高于U-2OS及Saos-2,骨肉瘤細(xì)胞U-2OS增殖能力,生長(zhǎng)速率高于Saos-2。其中骨肉瘤細(xì)胞MG-63與Saos-2相比P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.細(xì)胞周期結(jié)果顯示:MG-63細(xì)胞在G0/G1期數(shù)值63.4%,S期18.5%,G2/M期18.1%。U-2OS細(xì)胞在GO/G1期數(shù)值43.5%,S期30.3%,G2/M期22.3%。Saos-2細(xì)胞在GO/G1期數(shù)值28.1%,S期35.3%,G2/M期36.5%。由以上結(jié)果可知,MG-63細(xì)胞中G0/G1期的細(xì)胞比例略大于U-2OS細(xì)胞和Saos-2細(xì)胞。3.根據(jù)劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)胞遷移速度由快到慢為MG-63U-2OSSaos-2。4.q PCR相對(duì)定量結(jié)果顯示CD44v2在骨肉瘤細(xì)胞MG-63表達(dá)最高,約分別是U-2OS及Saos-2細(xì)胞的94倍與70倍;CD44v5在骨肉瘤細(xì)胞MG-63中表達(dá)分別高于U-2OS及Saos-2細(xì)胞7.4倍與11.1倍;CD44v6在骨肉瘤細(xì)胞MG-63中的表達(dá)分別高于U-2OS及Saos-2細(xì)胞10倍與2.1倍。同時(shí)發(fā)現(xiàn)CD44v2在骨肉瘤細(xì)胞U-2OS與Saos-2中的表達(dá)沒有明顯差異;CD44v5和CD44v6在骨肉瘤細(xì)胞U-2OS中的表達(dá)高于Saos-2。由此推測(cè)骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞活力和遷移能力可能與CD44v2的表達(dá)程度成正比。結(jié)論:1.三種骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移能力不同:MG-63增殖速度最快,U-2OS次之,Saos-2最慢;MG-63遷移能力最快,U-2OS次之,Saos-2最慢。2.CD44v2、CD44v5、CD44v6在不同骨肉瘤細(xì)胞的表達(dá)有差異:其中CD44v2在MG-63表達(dá)最高,U-2OS次之,Saos-2最低。CD44v6在骨肉瘤MG-63細(xì)胞MG-63中表達(dá)高于U-2OS及Saos-2。CD44v5和CD44v6在骨肉瘤細(xì)胞U-2OS表達(dá)高于Saos-2。由此推測(cè)骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞活力和遷移能力可能與CD44v2的表達(dá)程度成正比。3.骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移能力不同可能與CD44v2、CD44v5、CD44v6基因的表達(dá)有關(guān),但這些變異體之間的相關(guān)性需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：骨肉瘤 CD44v2 CD44v5 CD44v6 生長(zhǎng)曲線 細(xì)胞周期 劃痕實(shí)驗(yàn) 熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-13
• 第1章 引言13-14
• 第2章 文獻(xiàn)綜述14-19
• 2.1 骨肉瘤及其流行病學(xué)研究14
• 2.2 CD44的基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)14-15
• 2.3 CD44與骨肉瘤及相關(guān)腫瘤關(guān)系的研究15-17
• 2.4 CD44與骨肉瘤最新研究17
• 2.5 小結(jié)17-19
• 第3章 材料與方法19-22
• 3.1 研究材料19
• 3.2 主要試劑及器材19
• 3.2.1 主要試劑19
• 3.2.2 主要儀器19
• 3.3 研究方法和步驟19-22
• 3.3.1 骨肉瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)曲線測(cè)定19-20
• 3.3.2 骨肉瘤細(xì)胞株細(xì)胞周期檢測(cè)20
• 3.3.3 劃痕實(shí)驗(yàn)20
• 3.3.4 U-2OS、MG-63、Saos-2 細(xì)胞RNA的提取20
• 3.3.5 U-2OS、MG-63、Saos-2 細(xì)胞RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA20-21
• 3.3.6 引物設(shè)計(jì)21
• 3.3.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR21
• 3.3.8 統(tǒng)計(jì)分析21-22
• 第4章 結(jié)果22-27
• 4.1 骨肉瘤細(xì)胞活力的變化22-23
• 4.2 骨肉瘤細(xì)胞周期的變化23
• 4.3 骨肉瘤細(xì)胞遷移能力檢測(cè)23-24
• 4.4 骨肉瘤細(xì)胞中RNA質(zhì)量的檢測(cè)24
• 4.5 骨肉瘤細(xì)胞中 CD44v2、CD44v5 和 CD44v6 基因表達(dá)的檢測(cè)24-25
• 4.6 CD44v2、CD44v5和CD44v6 引物特異性的檢測(cè)25
• 4.7 骨肉瘤細(xì)胞中 CD44v2、CD44v5 和 CD44v6 各基因相對(duì)定量值的變化25-27
• 第5章 討論27-29
• 第6章 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果33-34
• 致謝34

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