本文關(guān)鍵詞：人脂肪源干細(xì)胞與纖維蛋白膠共混在裸鼠體內(nèi)外的初步研究

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【摘要】：目的:掌握人脂肪源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的分離、培養(yǎng)方法,并探討其部分生物學(xué)特性。探討纖維蛋白膠對(duì)ADSCs增殖的影響。構(gòu)建一種新型可注射型生物支架材料,為臨床修復(fù)軟組織缺損奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.取脂肪抽吸術(shù)的脂質(zhì)部分,用酶消化法分離獲得ADSCs。倒置顯微鏡下觀察ADSCs體外培養(yǎng)形態(tài)學(xué)改變。利用MTT法檢測(cè)原代細(xì)胞活性并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;第3代(P3)細(xì)胞分別加入含胰島素、甲基黃嘌呤(IBMX)、地塞米松、吲哚美辛的條件培養(yǎng)基和含地塞米松、磷酸甘油、維生素C的條件培養(yǎng)基進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化成脂、成骨。油紅O染色、茜素紅染色定性,鏡下觀察ADSCs變化。2.體外培養(yǎng)人ADSCs,取P3細(xì)胞接種到96孔板,以不同濃度(纖維蛋白原與凝血酶比例:4∶1、2∶1、8∶3、5∶2)纖維蛋白膠浸潤(rùn)提取液培養(yǎng),用MTT法檢測(cè)ADSCs在不同濃度纖維蛋白膠上的增殖情況。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分5組:A組:單純纖維蛋白膠組,選用低濃度(纖凝比4:1)纖維蛋白膠;B組:單純純化后的脂肪顆粒組;C組:單純ADSCs組,細(xì)胞濃度為3×106/ml;D組:細(xì)胞-脂肪復(fù)合物,細(xì)胞濃度為3×106/ml與純化后的脂肪顆粒1:1混合;E組:細(xì)胞-支架復(fù)合物,細(xì)胞濃度為3×106/ml與纖維蛋白膠1:1混合。每組0.3ml分別注射至裸鼠背部皮下,5點(diǎn)/只,共10只。觀察各組植入后,裸鼠的生命體征及局部變化,8周后取出,分別進(jìn)行體積、濕重測(cè)定、HE染色等分析。結(jié)果:原代細(xì)胞顯示3-4h開始貼壁,最初呈類圓形,2-4d逐漸延伸,呈典型成纖維細(xì)胞。5d左右進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,2-3周單層細(xì)胞融合率可達(dá)90%左右,細(xì)胞排列緊密成旋渦狀。傳代后2-4h開始貼壁,增殖迅速,2-4d即可達(dá)80%。一般3-8代細(xì)胞增殖活躍,之后稍減弱。P3細(xì)胞分化成脂、成骨,油紅O染色鏡下可見細(xì)胞中間有脂滴,茜素紅染色可見橢圓形結(jié)節(jié)狀結(jié)構(gòu)。不同濃度纖維蛋白膠制備的浸潤(rùn)提取液所培養(yǎng)的ADSCs生長(zhǎng)曲線無(wú)明顯差異。本次實(shí)驗(yàn)10只裸鼠,植入復(fù)合物后生命體征平穩(wěn),注射部位未見明顯炎癥反應(yīng),B、D、E組均可見新生組織形成,A、C組未見組織。大體觀察,B組和D組可見明顯脂肪顆粒,E組可見新生組織,但略少于B、D組。HE染色B、D、E組均可見脂肪細(xì)胞,D組富含膠原蛋白及脂肪顆粒。體積:D組B組E組;濕重:D組B組E組。結(jié)論:構(gòu)建了一種簡(jiǎn)單有效的體外分離和培養(yǎng)ADSCs的方法,ADSCs生長(zhǎng)旺盛、增殖快,具有多向分化潛能,可以作為組織工程理想的種子細(xì)胞。不同濃度纖維蛋白膠對(duì)ADSCs的增殖無(wú)明顯影響,纖維蛋白膠有望成為ADSCs生長(zhǎng)的支架材料。ADSCs能在纖維蛋白膠上黏附、生長(zhǎng),纖維蛋白膠可以作為ADSCs的載體和組織工程支架材料。
【關(guān)鍵詞】：人脂肪源干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 可注射型支架材料 纖維蛋白膠 組織工程
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R622
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-19
• 2.1 實(shí)驗(yàn)組織及動(dòng)物12
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)組織12
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 2.2 主要儀器12
• 2.3 主要試劑12-13
• 2.4 主要試劑配制方法13-14
• 2.5 方法14-19
• 2.5.1 原代細(xì)胞的分離、培養(yǎng)14
• 2.5.2 細(xì)胞傳代14-15
• 2.5.3 繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線15
• 2.5.4 誘導(dǎo)成脂、油紅O染色15
• 2.5.5 誘導(dǎo)成骨、茜素染色15-16
• 2.5.6 纖維蛋白膠的制備16
• 2.5.7 纖維蛋白膠對(duì)ADSCs增殖影響的檢測(cè)方法16
• 2.5.8 單純純化脂肪顆粒的制備16-17
• 2.5.9 細(xì)胞-脂肪復(fù)合物制備17
• 2.5.10 細(xì)胞-支架復(fù)合物制備17
• 2.5.11 復(fù)合移植物17
• 2.5.12 新生組織體積測(cè)定17-18
• 2.5.13 新生組織濕重測(cè)定18
• 2.5.14 HE染色18
• 2.5.15 主要觀察指標(biāo)18-19
• 第3章 結(jié)果19-26
• 3.1 ADSCS形態(tài)學(xué)表現(xiàn)19
• 3.2 ADSCS的傳代培養(yǎng)19
• 3.3 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線19-20
• 3.4 油紅O染色觀察20-21
• 3.5 茜素紅染色21
• 3.6 纖維蛋白膠浸潤(rùn)液對(duì)ADSCS增殖的影響21-22
• 3.7 注射植入物后裸鼠局部反應(yīng)觀察22-23
• 3.8 新生組織體積比較23
• 3.9 新生組織濕重比較23
• 3.10 新生組織HE染色23-26
• 第4章 討論26-30
• 第5章 結(jié)論30-31
• 致謝31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果35-36
• 綜述36-46
• 參考文獻(xiàn)43-46

【相似文獻(xiàn)】

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