本文關(guān)鍵詞：SNAP-25在大鼠脊髓損傷后的作用機制研究

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【摘要】：目的研究在大鼠脊髓鈍挫傷后SNAP-25基因和蛋白的表達(dá)變化,探討SNAP-25對大鼠脊髓鈍挫傷后感覺功能和運動功能的影響,探討調(diào)控SNAP-25的信號通路。方法Sprague-Dawley(SD)大鼠124只隨機被分為假手術(shù)組(sham)和脊髓損傷組,脊髓損傷組分為1天組(1d),3天組(3d),7天組(7d),14天組(14d)和28天組(28d)等亞組。首先,采用改良的Allen’s方法制備大鼠脊髓鈍挫傷模型,用基因芯片技術(shù)篩選脊髓損傷后的差異表達(dá)基因,采用標(biāo)準(zhǔn)富集計算方法對差異基因進(jìn)行GO分析;其次,用q RT-PCR和免疫印跡實驗檢測SNAP-25的基因和蛋白的表達(dá)變化;采用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察SNAP-25在損傷脊髓中的定位表達(dá)。再次,采用溫痛覺和BBB評分評估大鼠脊髓損傷后感覺功能和運動功能變化;最后,用生物信息學(xué)方法預(yù)測調(diào)控SNAP-25的信號通路。結(jié)果1.基因芯片篩選脊髓損傷后差異表達(dá)的基因用基因芯片技術(shù)篩選脊髓損傷段的差異表達(dá)基因,結(jié)果表明脊髓損傷組與sham組比較獲得262個具有差異表達(dá)的基因,其中有249個都屬于下調(diào)表達(dá)的基因。根據(jù)下調(diào)基因的表達(dá)量和基因分布的生物學(xué)途徑等,SNAP-25、PEBP1、SNCB和AQP4被選出用于下一步驗證。2.差異表達(dá)基因的驗證q RT-PCR驗證篩選的差異表達(dá)基因,結(jié)果顯示SNAP-25,PEBP1,SNCB以及AQP4基因在脊髓損傷組表達(dá)比sham組降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。結(jié)合生物信息學(xué)分析和前期實驗結(jié)果,我們選擇SNAP-25作為本課題的研究因子。3.差異基因SNAP-25在脊髓鈍挫傷后表達(dá)變化q RT-PCR結(jié)果顯示SNAP-25 m RNA在脊髓鈍挫傷后1d,3d,7d,14d和28d表達(dá)明顯降低,變化差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫印跡實驗結(jié)果顯示SNAP-25蛋白水平在脊髓鈍挫傷后1d,3d,7d,14d和28d的表達(dá)也降低,并且在3d,7d,14d和28d與sham組比較具有明顯差異,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.SNAP-25蛋白的定位表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示SNAP-25在大鼠脊髓后角神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和突起中表達(dá),在損傷后的各個檢測時間點SNAP-25免疫陽性物的灰度值降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。此外,SNAP-25在脊髓前角神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞突起和神經(jīng)元的胞漿中表達(dá),并且SNAP-25免疫陽性細(xì)胞數(shù)在脊髓損傷后1d,3d,14d和28d表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.脊髓損傷后大鼠感覺功能的變化溫痛覺功能測試結(jié)果顯示大鼠后肢痛覺潛伏期在脊髓損傷后縮短。隨著時間的改變,sham組和脊髓損傷組的后肢痛覺潛伏期逐漸恢復(fù)。大鼠后肢痛覺潛伏期在脊髓損傷后7d,14d,21d和28d均低于sham組的潛伏期,并且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6.脊髓損傷后大鼠運動功能的變化BBB評分結(jié)果顯示大鼠后肢運動功能評分在脊髓損傷后急劇降低,在1d,7d,14d,21d和28d均低于sham組評分,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。7.脊髓損傷后調(diào)控SNAP-25的信號通路生物信息學(xué)分析表明SNAP-25與STAT3有關(guān)系,結(jié)果提示STAT3信號通路可能調(diào)控SNAP-25對脊髓損傷后的感覺和運動功能的作用。q RT-PCR實驗和免疫組織化學(xué)技術(shù)進(jìn)一步驗證脊髓損傷后STAT3基因表達(dá)降低,STAT3蛋白在脊髓神經(jīng)元中表達(dá),結(jié)果提示STAT信號通路調(diào)控SNAP-25發(fā)揮的作用功能。結(jié)論1.用基因芯片的方法篩選獲得在脊髓損傷后差異表達(dá)的基因SNAP-25。2.在脊髓損傷后SNAP-25的基因和蛋白表達(dá)下降。3.在脊髓損傷后,SNAP-25在脊髓后角神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)減少,溫痛覺測試結(jié)果顯示后肢感覺功能障礙,因此,SNAP-25可能影響大鼠脊髓損傷后的感覺功能。4.在脊髓損傷后,SNAP-25在脊髓前角運動神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)下降,大鼠后肢運動功能障礙,因此,SNAP-25可能對大鼠脊髓損傷后的運動功能有影響。5.大鼠脊髓損傷后,STAT3可能通過調(diào)控SNAP-25影響大鼠脊髓損傷后的感覺功能和運動功能。
【關(guān)鍵詞】：脊髓損傷 SNAP-25 感覺功能 運動功能
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 中英文縮寫詞對照表4-8
• 摘要8-11
• Abstract11-14
• 前言14-16
• 第一部分 大鼠脊髓損傷后差異基因的篩選和驗證16-29
• 1 引言16-17
• 2 實驗材料與方法17-21
• 2.1 實驗材料17-19
• 2.2 實驗方法19-21
• 3 實驗結(jié)果21-26
• 3.1 差異基因的篩選及分析21-25
• 3.2 差異基因的篩選25-26
• 3.3 差異基因的驗證26
• 4 討論26-27
• 5 結(jié)論27-29
• 第二部分SNAP-25在大鼠脊髓鈍挫傷后的表達(dá)變化29-53
• 1 引言29-30
• 2 實驗材料與方法30-43
• 2.1 實驗材料與試劑30-34
• 2.2 實驗方法34-43
• 3 結(jié)果43-49
• 3.1 SNAP-25在大鼠脊髓內(nèi)的基因和蛋白水平的表達(dá)變化43-44
• 3.2 SNAP-25在大鼠脊髓后角的定位表達(dá)44-45
• 3.3 大鼠脊髓損傷后溫痛覺的變化45-46
• 3.4 SNAP-25在大鼠脊髓前角的定位表達(dá)46-48
• 3.5 大鼠脊髓損傷后運動功能的變化48-49
• 4 討論49-52
• 4.1 SNAP-25基因和蛋白在脊髓損傷后的表達(dá)變化和意義49-50
• 4.2 SNAP-25在大鼠脊髓后角的表達(dá)以及對痛覺功能的影響50-51
• 4.3 SNAP-25在大鼠脊髓前角的表達(dá)以及對運動功能的影響51-52
• 5 結(jié)論52-53
• 第三部分 STAT3信號通路調(diào)控SNAP-25影響大鼠脊髓鈍挫傷后功能的恢復(fù)53-60
• 1 引言53-54
• 2 方法54
• 2.1 生物信息學(xué)分析54
• 2.2 qRT-PCR54
• 2.3 免疫組織化學(xué)技術(shù)54
• 3 結(jié)果54-58
• 4 討論58-59
• 5 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 文獻(xiàn)綜述67-76
• 參考文獻(xiàn)72-76
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果76-77
• 致謝77

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本文編號：878033