本文關(guān)鍵詞：Sox-9基因修飾BMSCs復(fù)合骨支架材料構(gòu)建組織工程椎間盤的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞 Sox-9基因 骨支架 椎間盤組織工程

【摘要】：目的:本研究利用異種骨制備的脫細(xì)胞脫鈣骨組織工程復(fù)合多孔支架,將傳代培養(yǎng)的Sox-9基因修飾后SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞種植于其中,并在Balb/c裸鼠皮下進(jìn)行移植,檢測(cè)細(xì)胞支架復(fù)合物的理化性能和生物相容性,探討其成為組織工程椎間盤的可行性,為椎間盤組織工程的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:(1)復(fù)蘇Sox-9基因修飾的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,采用常規(guī)辦法對(duì)其進(jìn)行傳代培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。同時(shí)將已經(jīng)制作成型的骨支架消毒,放入無菌的24孔板中,將已經(jīng)進(jìn)行過脫壁處理的基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于支架上,體外培養(yǎng)48小時(shí),倒置顯微鏡、掃描電鏡、組織學(xué)染色觀察細(xì)胞在支架上的粘附情況。(2)細(xì)胞支架復(fù)合物體外培養(yǎng)2天后,分實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)將其植入Balb/c裸鼠背部皮下。體內(nèi)培養(yǎng)2月后,肉眼觀察裸鼠背部植入部位情況;處死裸鼠,取出細(xì)胞支架復(fù)合物,行冰凍切片,掃描電鏡、組織學(xué)染色觀察細(xì)胞在支架上的生長情況,行II型膠原免疫組化染色,qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)支架中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的Sox-9基因、II型膠原表達(dá)水平。結(jié)果:(1)鏡下Sox-9基因修飾SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈長梭形,在第3代開始出現(xiàn)衰老的形態(tài)表現(xiàn);細(xì)胞接種支架后,倒置相差顯微鏡下、掃描電鏡、HE染色觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在支架上粘附良好。(2)細(xì)胞支架復(fù)合物體內(nèi)培養(yǎng)2月后,肉眼觀察在裸鼠皮下植入部位周圍無感染及炎癥反應(yīng),細(xì)胞支架復(fù)合物呈楔形,與皮膚內(nèi)面愈合,II型膠原免疫組化染色陽性,qRT-PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)側(cè)支架復(fù)合物中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的Sox-9基因、II型膠原表達(dá)水平比對(duì)照側(cè)高。P0.01,△P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:(1)使用靜態(tài)接種技術(shù)構(gòu)建骨支架材料與基因轉(zhuǎn)染BMSCs的復(fù)合體,可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞黏附于骨支架并在骨支架內(nèi)增殖;(2)體外構(gòu)建的細(xì)胞支架復(fù)合物在裸鼠皮下培養(yǎng)的方法得到的產(chǎn)物,經(jīng)檢測(cè)證實(shí)細(xì)胞仍能夠穩(wěn)定表達(dá)Sox-9目的基因和II型膠原,支架材料仍大部分存在,產(chǎn)物較體外培養(yǎng)更接近類軟骨組織。
【關(guān)鍵詞】：基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞 Sox-9基因 骨支架 椎間盤組織工程
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R318.08;R687
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-12
• 第一部分 基因修飾BMSCs傳代培養(yǎng)與接種骨支架后的生物相容性評(píng)估12-17
• 1 實(shí)驗(yàn)材料12-13
• 2 實(shí)驗(yàn)方法13-14
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果14-17
• 第二部分 細(xì)胞支架復(fù)合物種植裸鼠皮下體內(nèi)培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究17-24
• 1 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-24
• 討論24-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 文獻(xiàn)綜述32-40
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 附錄1 主要中英文對(duì)照表40-41
• 附錄2 發(fā)表論文和參加科研情況41-42
• 致謝42

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李晉;曲戎梅;戴景興;周志濤;原林;;豬骨支架材料與人骨支架材料的理化性能及力學(xué)特征(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年45期

2 楊林林;戴景興;崔甜甜;朱書濤;劉金偉;邱小忠;余磊;原林;;豬源性異種骨支架材料的生物相容性[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年44期

3 楊淵;李小峰;羅道明;溫超海;;同種異體松質(zhì)骨支架材料的制備及理化特性[J];中國組織工程研究;2012年47期

4 鮮蘇琴,柴楓,趙銥民,王忠義,劉小芳,李滌塵;成骨細(xì)胞在快速成型技術(shù)構(gòu)建的骨支架材料中粘附的實(shí)驗(yàn)研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2004年03期

5 昝青峰;莊媛;董利民;王晨;胡紅濤;許國華;;多孔β-TCP骨支架材料孔壁表面納米化研究[J];稀有金屬材料與工程;2011年S1期

6 楊澤輝;何惠宇;崔杰;王小志;周政;;煅燒與凍干制備去抗原異種骨支架材料的性能[J];中國組織工程研究;2013年51期

7 戴景興;楊林林;曲戎梅;周志濤;彭晨;張育敏;陳學(xué)英;原林;;異種骨支架材料的制備及其理化性能[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年18期

8 羅仁惠;杜建明;宋珂;曹穎光;;骨支架材料修復(fù)大鼠顱骨缺損的實(shí)驗(yàn)觀察[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

9 氋春陽;孫革;韓冬梅;;異種骨支架材料的研制及相關(guān)表征[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年03期

10 張學(xué)全;原林;楊林林;姜雪梅;楊春;余磊;戴景興;;脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞與異種骨支架材料生物相容性研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 付海羅;王德平;黃文e，

本文編號(hào)：794563