本文關(guān)鍵詞：氧化應(yīng)激活化RAW264.7巨噬細(xì)胞對MC3T3-E1成骨細(xì)胞遷移、增殖及成骨基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 氧化應(yīng)激 HO MCT-E細(xì)胞 RAW.細(xì)胞 成骨分化

【摘要】：目的探索氧化應(yīng)激活化RAW264.7巨噬細(xì)胞對MC3T3-E1成骨細(xì)胞遷移、增殖及成骨基因表達(dá)的影響。方法取MC3T3-E1細(xì)胞系及RAW264.7細(xì)胞系,分別培養(yǎng)傳至第7代進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。利用不同濃度(0、25、50、100μmol/L)H_2O_2刺激RAW264.7細(xì)胞,MTS檢測培養(yǎng)1、3、6 h后細(xì)胞增殖率,采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)檢測試劑盒檢測培養(yǎng)1 h時(shí)細(xì)胞內(nèi)SOD含量,篩選H2O2引起RAW264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激的最佳濃度和作用時(shí)間,并對應(yīng)收集RAW264.7細(xì)胞(加或不加H_2O_2處理)24 h上清液。取第7代MC3T3-E1細(xì)胞,分別以100μL無血清DMEM培養(yǎng)基(A組)、未氧化應(yīng)激RAW264.7細(xì)胞上清液(B組)、氧化應(yīng)激RAW264.7細(xì)胞上清液(C組)培養(yǎng),采用MTS法檢測細(xì)胞增殖情況,行劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力;另取細(xì)胞分為4組,空白對照組,以完全培養(yǎng)基培養(yǎng);陽性對照組,以含50μg/m L維生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸鈉的完全培養(yǎng)基進(jìn)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng);正常對照組,以含50μg/m L維生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸鈉的完全培養(yǎng)基及未氧化應(yīng)激RAW264.7細(xì)胞上清液培養(yǎng);實(shí)驗(yàn)組,以含50μg/m L維生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸鈉的完全培養(yǎng)基及氧化應(yīng)激RAW264.7細(xì)胞上清液培養(yǎng)。培養(yǎng)3、7、14 d,RT-PCR檢測細(xì)胞內(nèi)成骨相關(guān)基因ALP、Runx2、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)、Ⅰ型膠原蛋白(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)、骨鈣素(osteocalcin,OC)、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)表達(dá)水平。結(jié)果 MTS和SOD檢測結(jié)果顯示:25μmol/L H_2O_2刺激1 h為構(gòu)建RAW264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激模型最佳濃度和作用時(shí)間。細(xì)胞生長檢測顯示:1、2、3 d B、C組細(xì)胞增殖率顯著高于A組(P0.05),C組低于B組,其中2、3 d時(shí)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示12 h時(shí)B、C組MC3T3-E1細(xì)胞遷移顯著快于A組,C組快于B組,細(xì)胞遷移距離比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);24 h時(shí)B、C組劃痕已被細(xì)胞爬滿。除3 d外,實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)ALP、Runx2、OC、BSP m RNA相對表達(dá)量均較陽性對照組明顯降低,OPN、COL-Ⅰm RNA相對表達(dá)量較空白對照組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 H_2O_2構(gòu)建RAW264.7細(xì)胞氧化應(yīng)激模型的最佳濃度為25μmol/L、作用時(shí)間為1 h。氧化應(yīng)激活化RAW264.7巨噬細(xì)胞上清液能促進(jìn)MC3T3-E1成骨細(xì)胞遷移、抑制其增殖及成骨相關(guān)基因的表達(dá)。
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第八醫(yī)院脊柱外科;惠州市第三人民醫(yī)院骨科;中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院脊柱外科廣東省骨科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 氧化應(yīng)激 HO MCT-E細(xì)胞 RAW.細(xì)胞 成骨分化
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31430030)~~
【分類號(hào)】：R68
【正文快照】： △共同第一作者嚴(yán)重創(chuàng)傷、腫瘤切除、骨感染等原因所致的大段骨缺損、骨不愈合等臨床常見,目前主要治療方法包括藥物、內(nèi)固定、自體或同種異體骨以及組織工程骨移植修復(fù)等,但難以達(dá)到理想治療效果。骨組織愈合是一個(gè)復(fù)雜過程,包括早期單核巨噬細(xì)胞募集、炎性因子產(chǎn)生、MSCs募

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