本文關(guān)鍵詞：miR-329調(diào)控E2F1對(duì)人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞增殖及分化的影響

  更多相關(guān)文章： miR-329 E2F1 骨肉瘤 增殖 分化

【摘要】：背景和目的骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是一種原發(fā)性惡性骨腫瘤;在兒童和青少年高發(fā),以男性多見。該病惡性程度較高,容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移并且預(yù)后極差,有較高的致殘率。近年來,隨著治療方法的大幅度進(jìn)展,新的輔助放化療聯(lián)合外科手術(shù)等保肢治療方法已經(jīng)逐步取代了傳統(tǒng)的截肢手術(shù)。然而,現(xiàn)代的治療方法雖然從部分程度上提高了患者的生存率,但是術(shù)后5年的生存率仍然不盡人意。對(duì)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的患者來說,情況更不樂觀。由于化療藥物耐藥性的存在和外科手術(shù)存在一定的局限性,而骨肉瘤的確切發(fā)病機(jī)制尚未十分清楚,所以從根本上對(duì)骨肉瘤進(jìn)行治療仍然是一個(gè)難題。因此,新的診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物的識(shí)別以提高骨肉瘤患者的早期診斷,改善預(yù)后是相當(dāng)重要的。miRNA是一類小的非編碼RNA分子,能夠結(jié)合靶基因的3’非翻譯區(qū)域(UTR)從而發(fā)揮其調(diào)控作用。miRNA在多種生物過程中發(fā)揮作用,包括細(xì)胞分化、代謝和凋亡。近年來研究發(fā)現(xiàn),miRNA參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。miRNA已被證明在多種腫瘤中表達(dá)失調(diào),包括卵巢癌、結(jié)腸癌、乳腺癌和食管癌等。miRNA可以作用于多種靶基因,根據(jù)靶基因的不同,其可以發(fā)揮癌基因或抑癌基因的作用。轉(zhuǎn)錄因子E2F1在細(xì)胞周期中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。近年來,許多研究表明,E2F1在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中也參與調(diào)節(jié)并在多種癌癥中表達(dá)失調(diào),且在骨肉瘤中表達(dá)顯示為陽性。E2F1能夠參與調(diào)節(jié)全反式維甲酸誘導(dǎo)的骨肉瘤分化,而miRNA對(duì)E2F1又有一定的調(diào)控作用。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)選擇miR-329作為研究基因,將miR-329轉(zhuǎn)入骨肉瘤細(xì)胞U-2OS,探討其在骨肉瘤中發(fā)生發(fā)展中的作用,為骨肉瘤的基因治療提供理論依據(jù)、為進(jìn)一步的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:骨肉瘤細(xì)胞U-2OS培養(yǎng)后,實(shí)驗(yàn)分3組:miR-329組,細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-329;陰性對(duì)照組(negative control,NC):細(xì)胞轉(zhuǎn)染無關(guān)序列;空白組(Blank):細(xì)胞僅加入轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體。1.采用q RT-PCR檢測(cè)人成骨細(xì)胞h FOB1.19和骨肉瘤細(xì)胞U-2OS中miR-329和E2F1的表達(dá)水平。2.CCK-8法檢測(cè)miR-329對(duì)骨肉瘤細(xì)胞U-2OS增殖的影響。3.細(xì)胞轉(zhuǎn)染第14天,磷酸苯二鈉法檢測(cè)三組細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性改變;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)三組細(xì)胞內(nèi)I型膠原蛋白的含量。4.Western blot檢測(cè)三組細(xì)胞內(nèi)E2F1、OPN、Runx2和RARα蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.骨肉瘤細(xì)胞中,miR-329的表達(dá)水平低于成骨細(xì)胞(P0.05);E2F1的表達(dá)水平高于成骨細(xì)胞(P0.05)。2.細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,miR-329組骨肉瘤細(xì)胞的增殖水平低于空白組和陰性對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而空白組與陰性對(duì)照組之間的細(xì)胞增殖能力相接近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.在細(xì)胞轉(zhuǎn)染的第14天,miR-329組堿性磷酸酶的活性和I型膠原蛋白的含量高于空白組和陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);空白組堿性磷酸酶的活性和I型膠原蛋白的含量與陰性對(duì)照組相接近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.E2F1的蛋白表達(dá)量在miR-329組低于空白組和陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);空白組與陰性對(duì)照組E2F1的蛋白表達(dá)量相接近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。miR-329組OPN、Runx2和RARα的蛋白表達(dá)量高于空白組和陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而空白組OPN、Runx2和RARα的蛋白表達(dá)量與陰性對(duì)照組相接近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.miR-329能夠通過作用于E2F1抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力,并且誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞的成骨分化能力。2.本實(shí)驗(yàn)為骨肉瘤的基因治療提供理論依據(jù),為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：miR-329 E2F1 骨肉瘤 增殖 分化
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略詞表11-12
• 引言12-14
• 材料和方法14-26
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-32
• 討論32-36
• 小結(jié)36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 綜述 microRNA在骨肉瘤中的研究進(jìn)展41-67
• 參考文獻(xiàn)58-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在校期間發(fā)的論文67-68
• 致謝68

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李繼慶;高危骨肉瘤的研究進(jìn)展[J];中國(guó)矯形外科雜志;2003年13期

2 胡牧,錢光,梅炯,蔡宣松;骨肉瘤的肺外轉(zhuǎn)移[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).骨科學(xué)分冊(cè);2004年03期

3 劉洪彪,葉小娟,占宏偉,孫達(dá);骨肉瘤放射性核素骨顯像50例分析[J];實(shí)用腫瘤雜志;2005年01期

4 周忠;林建華;;骨肉瘤的中西醫(yī)結(jié)合治療研究進(jìn)展[J];甘肅中醫(yī);2006年03期

5 楊茂偉;王加璐;王旭東;羅輯;;X線表現(xiàn)陰性骨肉瘤的早期診斷[J];中國(guó)腫瘤臨床;2008年22期

6 張淑彬;吳朝平;;骨肉瘤患者父母的焦慮狀況調(diào)查分析[J];華西醫(yī)學(xué);2008年06期

7 徐新華;周福祥;;20例兒童骨肉瘤的臨床治療[J];中醫(yī)兒科雜志;2008年02期

8 王建華;林艷;賈衛(wèi)斗;云得才;許英杰;鄭鐵鋼;;骨肉瘤的診斷與治療[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年30期

9 李毅星;閆文濤;楊本華;;骨肉瘤31例早期診斷分析[J];中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2010年11期

10 徐欣華;李曉琴;楊榮;劉芳;康雅瓊;何欣;尚立娜;;血小板衍生生長(zhǎng)因子受體-a在骨肉瘤中的表達(dá)及意義[J];甘肅醫(yī)藥;2012年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 許少健;張葆青;劉金文;石宇雄;黃永明;;16例骨肉瘤患者化療期間的相關(guān)心理分析[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)骨傷分會(huì)第四屆第二次會(huì)議論文匯編[C];2007年

2 馬月新;;骨肉瘤化療期間的護(hù)理對(duì)策[A];全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2005年

3 陳秋;王達(dá)輝;閔若良;馬巍;;應(yīng)用大段異體骨治療兒童骨肉瘤的初步體會(huì)[A];2007年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)骨科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省抗癌協(xié)會(huì)骨軟腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

4 鄭進(jìn)佑;;骨肉瘤的現(xiàn)代外科治療概況[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)骨傷科專業(yè)委員會(huì)第十二次學(xué)術(shù)年會(huì)浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)骨傷科專業(yè)委員會(huì)第十次學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年

5 余寧先;;骨肉瘤病人家屬的心理護(hù)理[A];全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2004年

6 汪偉;陳文直;周潔敏;白玲;劉文英;葉慧義;;高強(qiáng)度聚焦超聲治療骨肉瘤的臨床應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)超聲醫(yī)學(xué)新進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 曹慶選;李文華;曹來賓;夏寶樞;;中藥治愈骨肉瘤的中醫(yī)研究與影像學(xué)對(duì)照[A];第十次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)術(shù)研討會(huì)暨全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)研究與診斷學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2009年

8 王英;肖艦;陳曉華;;骨肉瘤病人癌性疼痛的護(hù)理體會(huì)[A];全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2003年

9 陳秋;王達(dá)輝;閔若良;馬巍;;大段異體骨治療兒童骨肉瘤的初步應(yīng)用[A];2005'中國(guó)修復(fù)重建外科論壇論文匯編[C];2005年

10 劉巧慧;韓莎莎;;骨肉瘤保肢患者的心理護(hù)理[A];全國(guó)外科、神經(jīng)內(nèi)外科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張中橋;骨肉瘤病理基礎(chǔ)與其MRI表現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉義慶;雄烯二酮衍生物DSTD誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞自噬和減輕其耐藥性的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 尚永軍;TIM-3在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

3 禚文昆;MiR-20a調(diào)節(jié)EGR2對(duì)骨肉瘤的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 高琰;CD44在卵巢癌/骨肉瘤進(jìn)展中的作用及上轉(zhuǎn)換納米逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的研究[D];鄭州大學(xué);2016年

5 趙加力;B7-H3在骨肉瘤微環(huán)境中的表達(dá)及其作用機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2016年

6 林博川;MicroRNA-184在骨肉瘤阿霉素耐藥中的功能與機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

7 包擁政;miR-664調(diào)控靶基因SOX7促進(jìn)MG-63骨肉瘤細(xì)胞體外侵襲和遷移機(jī)理研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 陳斌;miR-664下調(diào)靶基因FOXO4促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞惡性增殖及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

9 閆廣寧;骨肉瘤干細(xì)胞自我更新的調(diào)控機(jī)制及意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

10 程思;S100A9在骨肉瘤中的表達(dá)和對(duì)骨肉瘤功能作用的影響及相關(guān)機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 靳曉建;新輔助化療結(jié)合保肢手術(shù)治療骨肉瘤的臨床療效分析[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王亞鵬;褪黑素聯(lián)合順鉑、甲氨蝶呤對(duì)骨肉瘤SaOS-2細(xì)胞增殖的影響[D];山東大學(xué);2015年

3 陳記軍;骨肉瘤患者血清中特異性microRNA表達(dá)譜的篩選及其臨床意義的研究[D];南京大學(xué);2013年

4 康學(xué)華;骨肉瘤中WIF-1基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化及mRNA的表達(dá)研究[D];青島大學(xué);2015年

5 李騰飛;HIF-1α和PTEN在骨肉瘤中的表達(dá)及其臨床意義[D];南華大學(xué);2015年

6 關(guān)國(guó)鋒;CXCR4靶點(diǎn)近紅外光學(xué)分子成像檢測(cè)骨肉瘤原位及肺轉(zhuǎn)移腫瘤病灶的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 王志濤;CD44s、CD44v6及CD44v9在骨肉瘤、骨巨細(xì)胞瘤及骨軟骨瘤標(biāo)本的表達(dá)及臨床意義[D];吉林大學(xué);2016年

8 榮小麗;LIMK1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染骨肉瘤耐藥細(xì)胞系的建立及其增殖侵襲能力的研究[D];吉林大學(xué);2016年

9 關(guān)紅亞;miR-192靶向TCF7基因?qū)侨饬黾?xì)胞增殖和侵襲的抑制作用[D];鄭州大學(xué);2016年

10 閆紅衛(wèi);骨肉瘤臨床診治的影像學(xué)檢查優(yōu)化探討[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：637441