本文關(guān)鍵詞：川芎嗪對大鼠急性脊髓損傷后GFAP表達的影響

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【摘要】：目的:觀察大鼠急性脊髓損傷后GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白,glial fibrillary acidic protein)在受損脊髓的不同時間點的表達變化,分析GFAP在脊髓內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的增殖和分化過程中的作用機制,明確川芎嗪治療脊髓損傷的分子機制。方法:將SD大鼠隨機分為正常對照組(A組36只)、假手術(shù)組(B組36只)、模型組(C組36只),川芎嗪干預(yù)組(D組36只)。用改良Allen's法建立大鼠急性脊髓損傷模型。D組在傷后每日2%鹽酸川芎嗪注射液腹腔注射,200 mg/kg(首次給藥在術(shù)后30 min),A、B、C三組在同一時間給予等量生理鹽水。共10天。于造模后第8小時、1天、3天、7天、14天、28天進行斜板實驗、BBB評分神經(jīng)功能行為學(xué)評價。于造模后第8小時、1天、3天、7天、14天、28天每組分別處死6只大鼠,以脊髓受損處為中心上下長各約5mm取大鼠的脊髓進行HE染色、尼氏染色、免疫組化檢測。用HE染色和尼氏染色觀察脊髓的病理形態(tài)學(xué)變化,用免疫組化法檢測代表脊髓內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的Brdu+細胞和Nestin+細胞的表達,及GFAP在大鼠脊髓表達變化情況。對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析,并對Brdu+和Nestin+細胞、GFAP在脊髓中的表達進行相關(guān)性分析。結(jié)果:1、大鼠造模損傷脊髓后,C組、D組大鼠的后肢運動功能顯著降低,脊髓功能嚴重損傷,大鼠在斜板上維持的最大角度與BBB評分均明顯降低,與A組比較有顯著性差異(P0.01);D組大鼠治療后在斜板上維持的最大角度呈明顯上升趨勢,在第14天、28天與模型對照組對比有顯著差異(P0.05)。D組大鼠在治療后BBB評分逐漸增加,在第3天、14天、28天與C組比較有顯著差異(P0.01);2、通過大鼠脊髓組織切片進行HE染色和尼氏染色觀察各組大鼠脊髓組織的病理學(xué)變化。脊髓損傷后可見受損脊髓水腫,局灶性出血,神經(jīng)元胞體皺縮、核固縮,尼氏小體開始n少和消失,神經(jīng)元變性,第3天后出現(xiàn)脊髓水腫加重,局灶性出血范圍增大,炎性細胞浸潤明顯,灰質(zhì)部分組織溶解形成空泡;至第7天、14天壞死范圍進一步擴大,炎癥水腫逐漸減輕,至第28天,壞死區(qū)周圍瘢痕增生,向壞死區(qū)填充。川芎嗪能明顯減輕脊髓損傷后水腫、炎性細胞浸潤及出血程度,保護神經(jīng)細胞,促進脊髓組織修復(fù);3、脊髓損傷后,Brdu+細胞被激活,在脊髓中的表達明顯增多,在脊髓白質(zhì)、灰質(zhì)及中央管室管膜區(qū)均有表達。在第7天達到峰值,隨后逐漸減少。川芎嗪能明顯促進Brdu+細胞增殖,在損傷后第7天、14天、28天,與C組比較有顯著差異(P0.01)。川芎嗪能顯著促進Nestin+細胞表達,在第7天達到峰值,在損傷后第7天、14天、28天與C組比較有顯著性差異(P0.01);川芎嗪能顯著促進GFAP+細胞表達,在第7天達到峰值,在損傷后第7天、14天、28天與C組比較有顯著性差異(P0.01)。4、經(jīng)對GFAP表達、Nestin+細胞和Brdu+細胞在脊髓中的表達數(shù)進行相關(guān)性分析,GFAP表達與Nestin+細胞表達呈正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:1、GFAP的表達與脊髓內(nèi)源性干細胞的增殖分化呈正相關(guān)趨勢;2、川芎嗪能夠?qū)顾钃p傷后內(nèi)源性神經(jīng)干細胞增殖分化有促進作用;3、川芎嗪能夠促進脊髓損傷后GFAP的表達。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)纖維酸性蛋白 急性脊髓損傷 內(nèi)源性神經(jīng)干細胞 川芎嗪
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• abstract5-11
• 前言11-15
• 第一部分 材料與方法15-23
• 1 實驗材料15-16
• 1.1 主要材料和試劑15
• 1.2 主要儀器和設(shè)備15-16
• 2 實驗方法16-21
• 2.1 動物分組及模型建立16
• 2.1.1 動物分組16
• 2.1.2 大鼠急性脊髓損傷模型的建立16
• 2.2 藥物干預(yù)16-17
• 2.3 術(shù)后護理17
• 2.4 神經(jīng)功能及行為學(xué)觀察17-19
• 2.4.1 Basso Beattie Bresnahan (BBB)運動功能評分17-19
• 2.4.2 Ravlin斜板實驗19
• 2.5 取材19
• 2.6 HE染色觀察19-20
• 2.7 尼氏染色觀察20
• 2.8 免疫組織化學(xué)法檢測Brdu+、nestin+、GFAP細胞的表達20-21
• 3 統(tǒng)計學(xué)分析21-23
• 第二部分 實驗結(jié)果23-37
• 1 神經(jīng)功能及行為學(xué)評價23-28
• 1.1 BBB評分23-25
• 1.2 改良Rivlin斜板實驗25-28
• 2 HE染色結(jié)果28
• 3 尼氏染色結(jié)果28-29
• 4 免疫組織化學(xué)法檢測BrdU+、Nestin+和GFAP陽性細胞結(jié)果29-37
• 4.1 Brdu陽性細胞檢測結(jié)果29-31
• 4.2 Nestin陽性細胞檢測結(jié)果31-33
• 4.3 GFAP陽性細胞檢測結(jié)果33-37
• 第三部分 討論37-63
• 1 急性脊枿損傷病因病機的中醫(yī)角度的認識37-38
• 2 改良Allen’s急性脊髓損傷模型的評估38-40
• 3 星形膠質(zhì)細胞細胞骨架及生物學(xué)功能40-41
• 4 急性脊髓損傷后內(nèi)源性脊髓神經(jīng)干細胞增殖分化41-45
• 5 脊髓微環(huán)境對內(nèi)源性脊髓神經(jīng)干細胞增殖與分化的影響45-48
• 5.1 促進脊髓損傷修復(fù)過程中內(nèi)源性脊髓神經(jīng)干細胞增殖分化的微環(huán)境3545-47
• 5.2 抑制脊髓損傷修復(fù)過程中內(nèi)源性脊髓神經(jīng)干細胞增殖分化的微環(huán)境47-48
• 6 川芎嗪對急性脊髓損傷的修復(fù)過程中的影響48-55
• 6.1 中藥成分川芎嗪對急性脊髓損傷后的脊髓神經(jīng)功能及行為學(xué)方面的影響48-50
• 6.2 中藥成分川芎嗪對脊髓急性損傷后組織病理改變方面的影響50-51
• 6.3 中藥成分川芎嗪干預(yù)在急性脊髓損傷治療方面的機理51-55
• 7 纖維酸性星形膠質(zhì)細胞標志物GFAP與神經(jīng)干細胞55-63
• 7.1 GFAP在正�；铙w內(nèi)的分布55-57
• 7.2 星形膠質(zhì)細胞與神經(jīng)干細胞57-59
• 7.3 GFAP在損傷脊髓組織中的表達變化59-61
• 7.4 GFAP表達與脊髓內(nèi)源性神經(jīng)干細胞增殖分化的相關(guān)性分析61-63
• 第四部分 結(jié)論63
• 第五部分 創(chuàng)新點63-64
• 參考文獻64-75
• 附圖75-93
• 縮略詞表93-94
• 綜述94-105
• 參考文獻99-105
• 致謝105-106
• 研究生在校期間發(fā)表的論文及科研情況106

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