本文關(guān)鍵詞：純化血小板對大鼠軟骨細(xì)胞增殖及膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠軟骨修復(fù)的作用研究

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【摘要】：目的:觀察純化血小板(purified platelet rich plasma,pPRP)對大鼠軟骨細(xì)胞增殖及膝骨關(guān)節(jié)炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠軟骨修復(fù)的作用。方法:取5只SD大鼠抽取腹主動脈血,經(jīng)多次離心后獲得pPRP,并制成低(1×10~6個·mL~(-1))、中(1×10~7個·mL~(-1))、高(1×10~8個·mL~(-1))3種濃度的pPRP。5只SD大鼠抽取腹主動脈血后脫頸處死,取膝關(guān)節(jié)軟骨分離軟骨細(xì)胞。將培養(yǎng)的第3代軟骨細(xì)胞分為生理鹽水組、pPRP低濃度組、pPRP中濃度組和pPRP高濃度組,每組設(shè)5個復(fù)孔。各組細(xì)胞以無血清IMDM培養(yǎng)基處理后,生理鹽水組更換為含10%FBS的培養(yǎng)基,pPRP低濃度組、pPRP中濃度組和pPRP高濃度組分別更換為含10%FBS和低、中、高濃度pPRP的培養(yǎng)基。分別于培養(yǎng)24、48、72 h后采用CCK-8法測定細(xì)胞增殖情況。另外選取30只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、KOA模型組和pPRP治療組,每組10只。KOA模型組、pPRP治療組大鼠通過向雙側(cè)膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射碘乙酸進(jìn)行KOA造模,空白組不進(jìn)行造模。1周后,向pPRP治療組大鼠雙側(cè)后肢膝關(guān)節(jié)腔各注射50μL高濃度pPRP,向空白組和KOA模型組大鼠膝關(guān)節(jié)腔注射等量生理鹽水,每周1次,共注射4次。藥物干預(yù)結(jié)束后分別對各組大鼠進(jìn)行步態(tài)分析、膝關(guān)節(jié)X線檢查及膝關(guān)節(jié)病理學(xué)觀察。結(jié)果:①軟骨細(xì)胞增殖測定結(jié)果。培養(yǎng)24、48、72 h后4組軟骨細(xì)胞活力比較,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(0.411±0.014,0.458±0.052,0.473±0.029,0.489±0.011,F=5.860,P=0.007;0.502±0.003,0.551±0.022,0.568±0.019,0.572±0.029,F=12.196,P=0.000;0.619±0.008,0.747±0.006,0.754±0.031,0.763±0.018,F=67.065,P=0.000)。培養(yǎng)24 h后,pPRP低濃度組、pPRP中濃度組、pPRP高濃度組細(xì)胞活力均高于生理鹽水組(P=0.026;P=0.003;P=0.000);pPRP高濃度組和pPRP中濃度組的細(xì)胞活力均高于pPRP低濃度組(P=0.028;P=0.008);pPRP高濃度組的細(xì)胞活力高于pPRP中濃度組(P=0.002)。培養(yǎng)48 h后,pPRP低濃度組、pPRP中濃度組、pPRP高濃度組細(xì)胞活力均高于生理鹽水組(P=0.002;P=0.008;P=0.006);pPRP高濃度組和pPRP中濃度組的細(xì)胞活力均高于pPRP低濃度組(P=0.033;P=0.027);pPRP高濃度組的細(xì)胞活力高于pPRP中濃度組(P=0.002)。培養(yǎng)72 h后,pPRP低濃度組、pPRP中濃度組、pPRP高濃度組細(xì)胞活力均高于生理鹽水組(P=0.000;P=0.000;P=0.000);pPRP高濃度組和pPRP中濃度組的細(xì)胞活力均高于pPRP低濃度組(P=0.016;P=0.033);pPRP高濃度組的細(xì)胞活力高于pPRP中濃度組(P=0.029)。②步態(tài)分析結(jié)果。3組大鼠跑步過程中單位時間內(nèi)(1 s)左后肢和右后肢著地面積比較,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義[(2.36±0.49)cm~2,(1.68±0.18)cm~2,(1.98±0.26)cm~2,F=10.320,P=0.005;(2.82±0.59)cm~2,(1.91±0.29)cm~2,(2.41±0.31)cm~2,F=11.790,P=0.002]。空白組、pPRP治療組大鼠左后肢著地面積均大于KOA模型組(P=0.002;P=0.008);空白組、pPRP治療組大鼠右后肢著地面積均大于KOA模型組(P=0.001;P=0.002);空白組與pPRP治療組大鼠左后肢及右后肢著地面積比較,組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.050;P=0.068)。③X線檢查結(jié)果。X線片顯示空白組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨完整,關(guān)節(jié)面平整;KOA模型組關(guān)節(jié)軟骨明顯退變,脛骨平臺與股骨遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)面均不平整,有骨贅樣組織形成,并有軟骨缺損跡象;與KOA模型組相比,pPRP治療組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨退變程度較輕微。④病理學(xué)檢查結(jié)果。與空白組相比,KOA模型組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨面明顯缺損,缺損處軟骨細(xì)胞丟失,軟骨細(xì)胞排列紊亂,軟骨下骨硬化,骨小梁面積明顯減小,骨髓腔細(xì)胞增生、排列紊亂,骨小梁中的骨細(xì)胞明顯減少;pPRP治療組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨面基本光滑,表面未見明顯缺損或裂隙,部分區(qū)域內(nèi)可見軟骨細(xì)胞丟失,軟骨下骨骨小梁排列尚整齊,骨小梁稀疏變窄,部分?jǐn)嗔�。結(jié)論:pPRP可促進(jìn)大鼠軟骨細(xì)胞增殖;高濃度的pPRP可以在一定程度上修復(fù)KOA大鼠退變的關(guān)節(jié)軟骨,改善運動能力。
【作者單位】： 浙江中醫(yī)藥大學(xué);浙江省中醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 骨關(guān)節(jié)炎 膝關(guān)節(jié) 軟骨細(xì)胞 富血小板血漿 細(xì)胞增殖 大鼠 動物實驗
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項目(81302989) 浙江省重點科技創(chuàng)新團(tuán)隊自主項目(2011R50022-02) 高校博士點基金青年教師項目(20133322120006) 浙江省中醫(yī)藥科技計劃項目(2013ZQ007)
【分類號】：R684.3
【正文快照】： Effect of purified platelet rich plasma on chondrocyte proliferation in rats and cartilage repair in rats withknee osteoarthritis:an experimental studyYUAN Xiaoqiang1,JIN Wangdong1,ZHOU Yunjing1,YE Xijia1,GUO Jiana1,SHAN Letian1,TONG Peijian2,XIAO Luwei1

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本文編號：591812