本文關鍵詞：滑膜間充質(zhì)干細胞體內(nèi)外成骨特性的實驗研究

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【摘要】：目的探討大鼠滑膜間充質(zhì)干細胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)生物學特性及誘導成骨的可行性,評估SMSCs復合羥基磷灰石/殼聚糖/聚乳酸(hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid,HA/CS/PLLA)支架材料在體內(nèi)異位成骨能力。方法采用酶消化法和貼壁法分離培養(yǎng)SMSCs,并利用流式細胞儀檢測細胞表型,SMSCs成脂及成骨誘導后分別行油紅O染色、ALP染色和茜素紅染色鑒定。取第3代SMSCs,成骨誘導1、7、14、21、28 d后,采用實時熒光定量PCR檢測骨鈣素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型膠原、ALP以及Runx-2m RNA表達情況;成骨誘導后1、3、5、7、9、11 d,采用ELISA法檢測ALP活性;成骨誘導后7、14、21、28 d,采用茜素紅S法檢測鈣鹽沉積;以正常培養(yǎng)SMSCs作為對照組。體內(nèi)實驗:取SD大鼠24只,隨機分為實驗組和對照組(n=12);取第3代SMSCs接種于HA/CS/PLLA支架材料,體外復合培養(yǎng)72 h后植入實驗組大鼠右下肢肌袋,對照組大鼠植入單純HA/CS/PLLA支架材料;術后4、8周通過X線片及組織學觀察分析SMSCs體內(nèi)成骨情況。結果提純后SMSCs CD147、CD90、CD105、CD44表達超過95%,而CD117、CD34、CD14、CD45表達低于10%;油紅O染色可見紅色脂滴形成,茜素紅染色可見紅色鈣化灶,ALP染色可見細胞質(zhì)呈咖啡樣深染。實時熒光定量PCR檢測示,SMSCs成骨誘導7 d,Ⅰ型膠原、ALP、Runx-2 m RNA表達顯著增加,誘導14 d OCN m RNA表達顯著增加。成骨誘導后5、7、9、11 d ALP活性明顯高于對照組,7 d時達峰值(P0.05)。成骨誘導14 d,鈣含量顯著增加,且隨誘導時間延長鈣含量逐漸增加(P0.05),且均高于對照組(P0.05)。體內(nèi)實驗術后4、8周影像學和組織學觀測結果顯示,兩組均可見新生骨形成,但實驗組成骨量明顯多于對照組(P0.05)。結論 SMSCs在體內(nèi)、體外均可誘導成骨,可成為骨組織工程的種子細胞。
【作者單位】： 皖南醫(yī)學院附屬弋磯山醫(yī)院創(chuàng)傷骨科;
【關鍵詞】： 滑膜間充質(zhì)干細胞 成骨誘導 茜素紅 ALP 新骨形成 大鼠
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81341054、81171732) 皖南醫(yī)學院人才引進基金資助項目(YJRC2009010)~~
【分類號】：R318.08;R687
【正文快照】： 骨質(zhì)破壞和骨缺損是臨床常見疾病,組織工程技術的發(fā)展為骨缺損修復提供了新方法�；らg充質(zhì)干細胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)是目前組織工程研究熱點。SMSCs易于獲取,體外增殖和分化能力強,較其他來源MSCs有明顯優(yōu)勢[1-3]。然而,SMSCs在體外誘導成骨以

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