本文關(guān)鍵詞：張力負(fù)荷下CC復(fù)合體介導(dǎo)的RhoA信號(hào)通路對(duì)大鼠終板軟骨細(xì)胞退變的影響與作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在體外建立大鼠終板軟骨細(xì)胞張力誘導(dǎo)退變模型,研究P-120catenin蛋白與RhoA/ROCK-1信號(hào)通路在體外張力誘導(dǎo)下終板軟骨細(xì)胞退變相互作用。方法:無(wú)菌條件下操作處理并分離大鼠腰椎部位終板軟骨,利用膠原酶以及胰酶提取終板軟骨細(xì)胞,培養(yǎng)并采用第二代終板軟骨細(xì)胞,采用FX-5000儀器施加牽張力建立終板軟骨細(xì)胞體外張力載荷模型;利用LIVE/DEAD染色方法以及流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞的存活率和細(xì)胞凋亡;通過(guò)鬼筆環(huán)肽染色來(lái)對(duì)終板軟骨細(xì)胞的細(xì)胞骨架變化進(jìn)行檢測(cè);采用組織學(xué)染色方法檢測(cè)脊柱組織以及終板軟骨細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)退變表達(dá);同時(shí)通過(guò)RhoA/ROCK-1信號(hào)通路抑制劑以及過(guò)表達(dá)E-cadherin、P120-catenin質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)控檢測(cè)來(lái)抑制各個(gè)信號(hào)及蛋白基因的表達(dá),來(lái)觀察其對(duì)終板軟骨細(xì)胞的影響;利用免疫共沉淀技術(shù)分析檢測(cè)E-cadherin和P120-catenin、P120-catenin和RhoA之間的相互偶聯(lián)作用;通過(guò)Realtime RT-PCR和Western blot檢測(cè)張力加載前后以及施加調(diào)控后的軟骨標(biāo)志基因二型膠原、SOX-9、蛋白聚糖的基因和蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè);免疫熒光檢測(cè)各個(gè)蛋白在終板軟骨細(xì)胞中的定位和表達(dá);結(jié)果:通過(guò)張力加載后,終板軟骨細(xì)胞中相關(guān)基因二型膠原、Sox9基因及蛋白聚糖的表達(dá)隨著加力的延長(zhǎng)逐漸下調(diào),軟骨細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)的合成受到明顯抑制。同時(shí)牽張力刺激能夠改變終板軟骨細(xì)胞的細(xì)胞骨架發(fā)生明顯改變,而終板軟骨細(xì)胞的凋亡則未見差異。隨著張力加載的作用下,終板軟骨細(xì)胞中RhoA/ROCK-1的基因與蛋白的表達(dá)明顯增高;抑制RhoA/ROCK-1信號(hào)通路后相關(guān)基因及蛋白表達(dá)降低,而終板軟骨細(xì)胞的退變明顯減輕。張力載荷作用下終板軟骨細(xì)胞中P120-catenin基因及蛋白水平均明顯降低,同時(shí)P120-catenin與E-cadherin蛋白之間的相互結(jié)合作用明顯降低;過(guò)表達(dá)P120-catenin蛋白后,軟骨細(xì)胞中P120-catenin基因表達(dá)顯著增高,E-cadherin的表達(dá)也明顯升高,P120-catenin和E-cadherin之間的相互結(jié)合作用也明顯升高,RhoA/ROCK-1信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)則有顯著降低,而張力作用下的終板軟骨細(xì)胞退變狀況也明顯減輕。結(jié)論:張力載荷作用下通過(guò)激活RhoA/ROCK-1信號(hào)通路使終板軟骨細(xì)胞發(fā)生退變;同時(shí),張力刺激還可通過(guò)抑制P120-catenin和E-cadherin之間的偶聯(lián)表達(dá)作用,使終板軟骨細(xì)胞退變加重。調(diào)控RhoA/ROCK-1信號(hào)通路及P120-catenin的表達(dá)能夠減輕終板軟骨的退變。
【關(guān)鍵詞】：間歇性循環(huán)張力 終板軟骨細(xì)胞 RhoA/ROCK-1信號(hào)通路 P120-catenin 退變
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R681.5
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-14
• 材料（資料、內(nèi)容）與方法14-35
• 1. 研究?jī)?nèi)容14-16
• 1.1 在體外建立大鼠終板軟骨細(xì)胞牽張力誘導(dǎo)模型15
• 1.2 觀察張力誘導(dǎo)前后終板軟骨細(xì)胞軟骨表型及生物學(xué)表型的改變15
• 1.3 觀察在牽張力誘導(dǎo)下RhoA/ROCK-1 信號(hào)通路在終板軟骨細(xì)胞中的表達(dá)和意義15
• 1.4 觀察在利用RhoA/ROCK-1 信號(hào)通路抑制劑時(shí)對(duì)牽張力下終板軟骨細(xì)胞退變的影響15-16
• 1.5 牽張力誘導(dǎo)前后終板軟骨細(xì)胞中P120-catenin及E-cadherin的表達(dá)及相互作用16
• 1.6 過(guò)表達(dá)P120-catenin及E-cadherin對(duì)牽張力加載前后RhoA/ROCK-1信號(hào)通路以及對(duì)終板軟骨細(xì)胞退變的影響16
• 2. 材料與方法16-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.2 主要試劑及儀器16-19
• 2.3 建立體外大鼠終板軟骨細(xì)胞牽張力加載模型19-22
• 2.4 施加牽張力前后終板軟骨細(xì)胞活力、凋亡、細(xì)胞骨架的檢測(cè)22-23
• 2.5 細(xì)胞及椎間盤組織染色實(shí)驗(yàn)23-25
• 2.6 RT-PCR法檢測(cè)終板軟骨細(xì)胞m RNA的表達(dá)25-27
• 2.7 Western blot法 （ 蛋白印記 ） 測(cè)定蛋白的表達(dá)27-30
• 2.8 RhoA的活性檢測(cè)30
• 2.9 免疫熒光及激光共聚焦檢測(cè)30-31
• 2.10 免疫共沉淀分子實(shí)驗(yàn)31-32
• 2.11 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建實(shí)驗(yàn)32-34
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理34-35
• 本實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖35
• 結(jié)果35-45
• 討論45-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 綜述58-64
• 參考文獻(xiàn)62-64
• 附錄64-66
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果66-67
• 致謝67-68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳露;吳小濤;王運(yùn)濤;;椎間盤退變生物學(xué)治療研究進(jìn)展[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年04期

2 徐宏光;陳小虎;王弘;王凌挺;陳學(xué)武;;兔椎體軟骨終板血管芽增齡性變化[J];中華骨科雜志;2011年04期

  本文關(guān)鍵詞：張力負(fù)荷下CC復(fù)合體介導(dǎo)的RhoA信號(hào)通路對(duì)大鼠終板軟骨細(xì)胞退變的影響與作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：504555