本文關(guān)鍵詞：半月板基質(zhì)及松質(zhì)骨源性的復(fù)合半月板支架修復(fù)兔內(nèi)側(cè)半月板缺損的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模喊朐掳鍝p傷后難以自行修復(fù),如何實(shí)現(xiàn)半月板的再生是醫(yī)學(xué)界面臨的巨大挑戰(zhàn),本課題的研究目的：1.利用脫細(xì)胞半月板基質(zhì)及脫礦松質(zhì)骨成功構(gòu)建脫細(xì)胞半月板基質(zhì)支架、脫礦松質(zhì)骨支架及脫細(xì)胞半月板基質(zhì)／脫礦松質(zhì)骨支架等三種組織工程半月板支架,并比較其理化學(xué)特性及動(dòng)物體內(nèi)免疫排斥反應(yīng);2.利用兔半月板纖維軟骨細(xì)胞(Meniscal Fibrochondrocytes, MFC)觀察三種支架的細(xì)胞毒性,細(xì)胞相容性及對(duì)纖維軟骨細(xì)胞表型的影響;3.分別將三種支架原位植入兔內(nèi)側(cè)半月板缺失模型中,觀察其促進(jìn)半月板再生情況以及對(duì)膝關(guān)節(jié)軟骨保護(hù)情況。實(shí)驗(yàn)方法：1.通過(guò)物理化學(xué)方法制備脫細(xì)胞半月板基質(zhì)水凝膠,利用改良Urist法制備脫礦松質(zhì)骨,最后利用真空灌注,模具塑形及冷凍干燥的方法制備三種不同的半月板支架;2.三種支架的理化學(xué)特性檢測(cè)：利用掃描電鏡觀察其微觀結(jié)構(gòu),利用組織學(xué)及生物化學(xué)方法檢測(cè)其組成成分,利用BOSE生物力學(xué)機(jī)檢測(cè)其拉伸及壓縮彈性模量：3.分別將三種支架植入SD大鼠皮下觀察其免疫排斥反應(yīng);4.將兔半月板纖維軟骨細(xì)胞分別種植到三種支架上,利用掃描電鏡觀察其細(xì)胞生長(zhǎng)微觀結(jié)構(gòu),利用死活染色觀察三種支架的細(xì)胞毒性,利用DNA、GAG及膠原定量分析生長(zhǎng)在三種不同支架上的纖維軟骨細(xì)胞在3、7、14天時(shí)細(xì)胞增殖及分泌GAG和膠原情況;5.將三種支架原位植入兔內(nèi)側(cè)半月板缺失模型中,并分別于3月、6月時(shí)處死取材,利用大體觀、組織學(xué)、X-RAY、MRI、生物力學(xué)測(cè)試及RT-PCR檢測(cè)觀察半月板再生情況及對(duì)膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨保護(hù)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.掃描電鏡結(jié)果顯示三種支架均具有良好的孔隙率及三維孔隙結(jié)構(gòu);脫細(xì)胞半月板基質(zhì)支架及脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架比脫礦松質(zhì)骨支架具有更高的GAG含量(P0.05);脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架與脫細(xì)胞半月板基質(zhì)支架及脫礦松質(zhì)骨支架相比具有更好的生物力學(xué)特性(P0.05);三種支架種植于大鼠皮下均未見明顯的免疫排斥反應(yīng);2.兔半月板纖維軟骨細(xì)胞均可在三種支架上生長(zhǎng),死活染色結(jié)果顯示其細(xì)胞存活率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;其細(xì)胞增殖及分泌GAG和膠原結(jié)果顯示：在7天和14天時(shí)種植于脫細(xì)胞半月板基質(zhì)支架和脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架上的纖維軟骨細(xì)胞其細(xì)胞增殖及分泌GAG和膠原能力均比種植于脫礦松質(zhì)骨支架上的高(P0.05)。3.免體內(nèi)原位植入結(jié)果顯示,空白缺損組及脫細(xì)胞半月板基質(zhì)組均未見明顯的新生半月板組織,僅有少量滑膜再生,脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架組及脫礦松質(zhì)骨組可見明顯的新生半月板組織,新生半月板組織學(xué)Ishida評(píng)分顯示脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架組明顯優(yōu)于脫礦松質(zhì)骨組(P0.05),相對(duì)應(yīng)的股骨髁及脛骨平臺(tái)軟骨Mankin評(píng)分結(jié)果顯示脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架組也明顯優(yōu)于其余三組(P0.05),X線K-L分級(jí)評(píng)分及核磁共振WORMS評(píng)分也均顯示脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架組優(yōu)于其余三組(P0.05),新生半月板拉伸力學(xué)測(cè)試結(jié)果顯示隨著植入時(shí)間的延長(zhǎng)其拉伸力學(xué)性能增強(qiáng),并且在同一時(shí)間點(diǎn)脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨組要優(yōu)于脫礦松質(zhì)骨組(P0.05),同時(shí)新生半月板mRNA表達(dá)結(jié)果顯示,隨著植入時(shí)間的延長(zhǎng)其Aggrecan、Sox9和Collagen Ⅱ表達(dá)均上升(P0.05),并且脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架組的表達(dá)量高于脫礦松質(zhì)骨組(P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨半月板支架具有良好的三維孔隙結(jié)構(gòu),相對(duì)于單純脫礦松質(zhì)骨支架和脫細(xì)胞半月板基質(zhì)支架相比具有更好的生物力學(xué)特性,并且可以促進(jìn)兔半月板纖維軟骨細(xì)胞增殖及分泌GAG和膠原成分。兔體內(nèi)原位植入實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架可以實(shí)現(xiàn)半月板的完全再生,并且可以保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨,阻止骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生,是一種良好的組織工程半月板支架材料。
【關(guān)鍵詞】：組織工程半月板 半月板再生 脫細(xì)胞半月板基質(zhì) 脫礦松質(zhì)骨 半月
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R687;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 引言12-20
• 參考文獻(xiàn)15-20
• 第一部分 三種半月板支架的制備及理化特性研究20-41
• 目的20
• 材料與方法20-25
• 一、主要的試劑及耗材20-21
• 二、主要的設(shè)備21
• 三、實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 結(jié)果25-37
• 一、半月板基質(zhì)脫細(xì)胞前后的比較25-29
• 二、脫細(xì)胞半月板基質(zhì)支架、脫礦松質(zhì)骨支架及脫細(xì)胞半月板基質(zhì)/脫礦松質(zhì)骨支架的制備及理化學(xué)和組織學(xué)特性比較29-35
• 三、三種支架的生物力學(xué)特性比較35-36
• 四、三種支架的大鼠皮下免疫排斥反應(yīng)36-37
• 討論37-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 第二部分 三種半月板支架的細(xì)胞相容性研究41-57
• 目的41
• 材料與方法41-45
• 一、主要的試劑及耗材41-42
• 二、主要的設(shè)備42
• 三、實(shí)驗(yàn)方法42-44
• 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法44-45
• 結(jié)果45-52
• 一、半月板纖維軟骨細(xì)胞種植于三種半月板支架45-46
• 二、掃描電鏡觀察46
• 三、死活細(xì)胞檢測(cè)46-48
• 四、纖維軟骨細(xì)胞增殖及分泌膠原、糖胺多糖情況48-52
• 討論52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 第三部分 三種支架修復(fù)兔內(nèi)側(cè)半月板缺損的實(shí)驗(yàn)研究57-93
• 目的57
• 材料與方法57-62
• 一、主要的試劑及耗材57-58
• 二、主要的設(shè)備58-59
• 三、實(shí)驗(yàn)方法59-62
• 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法62
• 結(jié)果62-83
• 一、大體觀62-65
• 二、新生半月板組織學(xué)65-70
• 三、軟骨保護(hù)作用70-73
• 四、X線檢查結(jié)果73-76
• 五、MRI檢查結(jié)果76-79
• 六、RT-PCR檢查結(jié)果79-82
• 七、力學(xué)檢查結(jié)果82-83
• 討論83-88
• 結(jié)論88-89
• 參考文獻(xiàn)89-93
• 縮略詞表93-95
• 文獻(xiàn)綜述95-113
• 參考文獻(xiàn)106-113
• 縮略詞表113-114
• 參加學(xué)術(shù)交流情況114-115
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況115-116
• 致謝116

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本文編號(hào)：492711