目的:建立鉗夾型C5脊髓損傷動物模型,用隔日限食進行干預,通過檢測脊髓組織中細胞凋亡和壞死性凋亡相關蛋白的表達情況,初步探索隔日限食對急性脊髓損傷大鼠細胞死亡的影響,為隔日限食促進脊髓損傷恢復的作用機制提供實驗依據(jù)。方法:采用動脈瘤夾鉗夾大鼠單側(cè)C5脊髓,建立鉗夾型脊髓損傷模型。術(shù)前4周,240只大鼠隨機分為術(shù)前自由飲食組(pre-AL)(180只)和預先干預組(pre-EODF)(60只),pre-AL組大鼠自由攝食、飲水,pre-EODF組大鼠給予EODF干預。4周后,pre-AL組大鼠再隨機分為:假手術(shù)組(Sham)、自由飲食組(AL)、立即干預組(post-EODF),每組60只。Sham組和AL組術(shù)后自由攝食、飲水,post-EODF組術(shù)后立即開始EODF干預,pre-EODF組術(shù)后繼續(xù)EODF干預。EODF是指禁食和自由攝食每隔24小時交替進行,但不限制飲水。分別于術(shù)后6小時、12小時、24小時、3天、7天采集各組大鼠受損部位的脊髓組織,用免疫組化法檢測脊髓中Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表達情況,TUNEL法檢測脊髓中的細胞凋亡情況,免疫印跡法檢測脊髓中TN...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
中英文縮略語表
引言
    1 研究背景
    2 課題來源
實驗研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要設備和儀器
        1.3 主要實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 實驗動物分組與干預措施
        2.2 動物造模
            2.2.1 術(shù)前準備
            2.2.2 模型制備
            2.2.3 術(shù)中和術(shù)后護理
        2.3 樣本采集
            2.3.1 免疫組化和TUNEL檢測的樣本采集
            2.3.2 免疫印跡和髓過氧化物酶活性檢測的樣本采集
        2.4 檢測指標
            2.4.1 一般情況觀察
            2.4.2 免疫組化法檢測大鼠脊髓損傷區(qū)Caspase-3、Bax和 Bcl-2 蛋白的表達
            2.4.3 TUNEL法檢測大鼠脊髓損傷區(qū)的細胞凋亡
            2.4.4 免疫印跡法檢測大鼠脊髓損傷區(qū)TNF-α、RIPK1和RIPK3 蛋白的表達
            2.4.5 髓過氧化物酶測試盒檢測大鼠脊髓損傷區(qū)MPO的活性
        2.5 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 一般情況
        3.2 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)凋亡相關蛋白表達的影響
            3.2.1 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)Bcl-2 蛋白表達的影響
            3.2.2 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)Bax蛋白表達的影響
            3.2.3 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)Caspase-3 蛋白表達的影響
            3.2.4 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷細胞凋亡的影響
        3.3 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)壞死性凋亡相關蛋白表達的影響
            3.3.1 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)TNF-α蛋白表達的影響
            3.3.2 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)RIPK1 蛋白表達的影響
            3.3.3 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)RIPK3 蛋白表達的影響
            3.3.4 EODF對急性SCI大鼠脊髓損傷區(qū)MPO活性的影響
    4 實驗結(jié)果小結(jié)
討論
    1 對脊髓損傷的認識
        1.1 脊髓損傷的病因和發(fā)病率
        1.2 脊髓損傷的繼發(fā)性損傷機制
        1.3 脊髓損傷的并發(fā)癥和慢性繼發(fā)性疾病
        1.4 脊髓損傷的神經(jīng)保護策略
            1.4.1 手術(shù)減壓
            1.4.2 甲基強的松龍
            1.4.3 康復治療
            1.4.4 基于神經(jīng)保護和神經(jīng)再生的其他治療方法
            1.4.5 脊髓損傷治療策略小結(jié)
    2 對飲食限制的認識
        2.1 飲食限制的分類和作用機制
        2.2 飲食限制對疾病的防治作用
            2.2.1 飲食限制與代謝性疾病
            2.2.2 飲食限制與心血管疾病
            2.2.3 飲食限制與癌癥
            2.2.4 飲食限制與退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病
            2.2.5 飲食限制與創(chuàng)傷性神經(jīng)系統(tǒng)疾病
    3 細胞死亡與脊髓損傷
        3.1 脊髓損傷中細胞死亡的分類
            3.1.1 脊髓損傷中的細胞凋亡
            3.1.2 脊髓損傷中的壞死性凋亡
        3.2 脊髓損傷中凋亡和壞死性凋亡共同信號通路——TNF/TNFR1 死亡受體通路
            3.2.1 細胞存活、凋亡和壞死性凋亡的共同上游途徑和機制
            3.2.2 TNF-α、RIPK1、RIPK3和Caspase-3在TNF/TNFR1 調(diào)控途徑中的作用
            3.2.3 脊髓損傷中細胞死亡機制小結(jié)
    4 脊髓損傷模型與節(jié)段的選擇
    5 結(jié)果討論
        5.1 EODF對脊髓損傷后細胞凋亡的影響
        5.2 EODF對脊髓損傷后細胞壞死性凋亡的影響
        5.3 討論總結(jié)
結(jié)論
本研究的創(chuàng)新點
問題與展望
致謝
參考文獻
附件1:文獻綜述
    參考文獻
附件2:在讀期間公開發(fā)表的學術(shù)論文、專著及科研成果



本文編號：3907755