目的:探索SUMO1及SENP1在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中的作用;明確SUMO1與SENP1在骨肉瘤細(xì)胞干性維持中的作用,以及對傳統(tǒng)化療敏感性的影響;以期為骨肉瘤的治療尤其是對化療不敏感的骨肉瘤干細(xì)胞的治療提供一種新的治療策略。方法:(1)(1)收集18例骨肉瘤患者標(biāo)本,分別制備提取骨肉瘤組織與鄰近腫瘤旁組織總蛋白,免疫蛋白印跡法檢測SUMO家族成員SUMO1與SENP1在骨肉瘤組織中的表達(dá);(2)免疫蛋白印跡法檢測hFOB1.19及143B、MG-63和U-2OS中SUMO1及SENP1的表達(dá);(3)CD133抗體標(biāo)記143B細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分選CD133⁺細(xì)胞和CD133^-細(xì)胞后將CD133⁺細(xì)胞和CD133^-細(xì)胞分別培養(yǎng),檢測SUMO1與SENP1蛋白表達(dá)差異;(4)使CD133⁺骨肉瘤干細(xì)胞分別處于細(xì)胞周期的靜止期、增殖期和衰老期,免疫印跡法檢測不同細(xì)胞周期SUMO1及SENP1蛋白表達(dá)水平及干性維持相關(guān)基因Oct4、HIF-1α及PCNA蛋白表達(dá)水平。(2)(1)RNA干擾沉...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1SENP1骨肉瘤及骨肉瘤干細(xì)胞中的表達(dá)（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1，SUMO1在骨肉瘤和鄰近組織中的表達(dá)

圖1SENP1骨肉瘤及骨肉瘤干細(xì)胞中的表達(dá)（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1，SUMO1在骨肉瘤和鄰近組織中的表達(dá)。**與腫瘤組相比，P<0.01。（B）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1，SUMO1在具有不同分化等級(jí)的骨肉瘤細(xì)胞系中的表達(dá)。與hFOB1.19組相....

圖2SUMO1基因沉默誘導(dǎo)骨肉瘤干細(xì)胞經(jīng)歷快速老化，強(qiáng)烈抑制細(xì)胞增殖和遷移，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（A）在SUMO1基因沉默后檢測SUMO1的表達(dá)

19圖2SUMO1基因沉默誘導(dǎo)骨肉瘤干細(xì)胞經(jīng)歷快速老化，強(qiáng)烈抑制細(xì)胞增殖和遷移，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（A）在SUMO1基因沉默后檢測SUMO1的表達(dá)。（B）SUMO1基因沉默（比例尺，50μm）后骨肉瘤干細(xì)胞的克隆球形態(tài)的改變。（C）通過流式細(xì)胞術(shù)檢測的CD133+1....

圖3SENP1過表達(dá)顯著降低干性維持，但僅略微影響骨肉瘤干細(xì)胞的遷移和凋亡（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后的蛋白質(zhì)SENP1，SUMO1的表達(dá)

21圖3SENP1過表達(dá)顯著降低干性維持，但僅略微影響骨肉瘤干細(xì)胞的遷移和凋亡（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后的蛋白質(zhì)SENP1，SUMO1的表達(dá)。（B）SENP1基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后的骨肉瘤干細(xì)胞的克隆球形態(tài)的改變（比例尺，50μm）。（C）在CD133+....

圖4SENP1過表達(dá)顯著增加骨肉瘤干細(xì)胞對HSVtk/GCV的體外敏感性（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測HSVtk基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文白質(zhì)（PCNA，Oct4，HIF-1α和Akt1），腫瘤細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白（MMP2和MMP9）和凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3。略微增加，流式細(xì)胞凋亡顯示與單獨(dú)處理組相比，聯(lián)合處理組經(jīng)歷著輕微的細(xì)胞凋亡（圖4B-D）。與圖3F中顯示的結(jié)果類似....

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