橫紋肌肉瘤(Rhabdomyoscarcoma,RMS)是一種未成年人多發(fā)性的橫紋肌樣惡性腫瘤,具有橫紋成肌細胞特性,擁有不同程度的分化潛能,并且細胞凋亡的關(guān)鍵上游誘導(dǎo)過程存在失調(diào)現(xiàn)象,因而具有凋亡抗性。抗RMS治療包括手術(shù),放療和聯(lián)合化療。盡管這些策略提高了存活率,由于缺乏針對性治療,治療率一直停滯不前。此外,流行的治療方法具有抗藥性和轉(zhuǎn)移性,導(dǎo)致幾種治療方案的失敗。對于高風(fēng)險RMS,顯然需要開發(fā)新穎的、更具針對性與安全性的療法。線粒體在腫瘤生長和進展中扮演重要角色,因為它們在癌癥新陳代謝和細胞存活途徑的調(diào)節(jié)中具有特殊作用。線粒體可通過調(diào)控鐵穩(wěn)態(tài)為各種細胞反應(yīng)進程提供能量及物質(zhì)基礎(chǔ),控制氧化還原等,并且參與誘導(dǎo)多種調(diào)節(jié)性細胞死亡(regulated cell death,RCD),其中線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換(mitochondrial permeability transition,MPT)驅(qū)動的死亡與線粒體改變尤為相關(guān)。以線粒體作為靶標(biāo)的癌癥治療策略已顯示出廣闊的前景,同時也對治療擁有凋亡抗性的癌癥細胞具有重要意義。作為具有橫紋肌特性的惡性腫瘤,橫紋肌肉瘤的生長和存活可能高度依賴于線粒...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 橫紋肌肉瘤概述
        1.1.1 橫紋肌肉瘤病理生理及分子生物學(xué)特點
        1.1.2 橫紋肌肉瘤中關(guān)鍵功能通路的變化
        1.1.3 橫紋肌肉瘤的治療和預(yù)后
        1.1.4 MicroRNA-7與橫紋肌肉瘤
    1.2 線粒體及其鐵離子穩(wěn)態(tài)
        1.2.1 線粒體基本結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.2 線粒體鐵離子吸收及利用
        1.2.3 線粒體鐵離子穩(wěn)態(tài)對線粒體功能的影響
    1.3 線粒體參與誘導(dǎo)的細胞死亡類型
        1.3.1 凋亡
        1.3.2 壞死性凋亡
        1.3.3 鐵死亡
        1.3.4 線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔介導(dǎo)的死亡
    1.4 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 藥品與試劑
        2.1.4 耗材與儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)、瞬時轉(zhuǎn)染及藥物處理
        2.2.2 CRISPR基因敲除實驗
        2.2.3 細胞活力、集落形成及細胞死亡測定
        2.2.4 實時定量PCR、載體構(gòu)建及雙熒光素酶實驗
        2.2.5 蛋白免疫印跡及免疫共沉淀
        2.2.6 胞質(zhì)與線粒體分離實驗
        2.2.7 線粒體形態(tài)、膜電位、ROS和ATP含量檢測
        2.2.8 線粒體內(nèi)膜通透性及鐵離子濃度檢測
        2.2.9 轉(zhuǎn)錄組測序及分析
        2.2.10 裸鼠成瘤實驗
        2.2.11 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 MiR-7在橫紋肌肉瘤中的抑癌作用及靶基因驗證
        3.1.1 MiR-7在體外對橫紋肌肉瘤的抑制作用
        3.1.2 MiR-7在體內(nèi)對橫紋肌肉瘤的抑制作用
        3.1.3 MiR-7介導(dǎo)橫紋肌肉瘤細胞死亡的線粒體靶基因驗證
        3.1.4 小結(jié)
    3.2 MFRN1缺失誘導(dǎo)MLKL依賴性橫紋肌肉瘤細胞死亡
        3.2.1 MFRN1缺失誘導(dǎo)橫紋肌肉瘤細胞死亡
        3.2.2 多種正常細胞系對MFRN1缺失不敏感
        3.2.3 MFRN1缺失誘導(dǎo)的細胞膜破裂依賴于MLKL的磷酸化
        3.2.4 小結(jié)
    3.3 線粒體先于MLKL感應(yīng)MFRN1缺失的致死信號
        3.3.1 MFRN1缺失引起線粒體相關(guān)基因表達異常
        3.3.2 MFRN1缺失對線粒體膜電位、ATP及ROS水平的影響
        3.3.3 MFRN1缺失誘導(dǎo)的線粒體損傷先于MLKL磷酸化
        3.3.4 小結(jié)
    3.4 MPT參與MFRN1缺失導(dǎo)致的線粒體損傷及死亡
        3.4.1 干涉CypD能緩解MFRN1缺失介導(dǎo)的致死效應(yīng)
        3.4.2 抑制CypD活性能阻止MFRN1缺失介導(dǎo)的線粒體損傷
        3.4.3 MFRN1缺失引起線粒體內(nèi)膜通透性增加
        3.4.4 MFRN1缺失導(dǎo)致CypD的線粒體積累增加及磷酸化水平升高
        3.4.5 小結(jié)
    3.5 MFRN1抑制mPTP開放的蛋白特性
        3.5.1 MFRN1的線粒體鐵轉(zhuǎn)運特性參與對MPT的抑制
        3.5.2 MFRN1通過與CypD的結(jié)合參與對MPT的抑制
        3.5.3 小結(jié)
4 討論
    4.1 MiR-7及其靶基因MFRN1下調(diào)對橫紋肌肉瘤的抗癌作用
    4.2 MFRN1缺失的致死機制
    4.3 MFRN1與橫紋肌肉瘤線粒體功能維持及細胞存活
    4.4 MFRN1與MPT
結(jié)論
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3827396