背景:骨不連是創(chuàng)傷骨科中困擾臨床的并發(fā)癥之一,目前自體骨移植等臨床主要治療方法的治愈率難以令人滿意,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。近年來隨著組織工程技術(shù)研究的深入,干細(xì)胞療法受到越來越多的關(guān)注,但仍有倫理、致畸等風(fēng)險(xiǎn)。外泌體是細(xì)胞分泌的囊泡,內(nèi)含核酸、蛋白質(zhì)等物質(zhì)以完成細(xì)胞間信息傳遞,研究證實(shí)外泌體可以發(fā)揮與源細(xì)胞類似的作用。本研究借助一種與骨組織有特殊親和力的水凝膠(piGEL)為載體,搭載尿源性干細(xì)胞來源的外泌體(USC-Exos),構(gòu)成凝膠外泌體復(fù)合體(USC-Exos-piGEL)通過體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該復(fù)合體對骨不連的治療效果。方法:本研究利用課題組前期建立的實(shí)驗(yàn)技術(shù),從人尿液中提取并培養(yǎng)尿源性干細(xì)胞(USC),通過超濾法提取其分泌的外泌體(USC-exos)用于研究。(1)通過TEM觀察USC-exos的形態(tài)、大小,通過qNANO技術(shù)測定外泌體粒徑和外泌體懸液的濃度。(2)通過CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell實(shí)驗(yàn)、成管實(shí)驗(yàn)在體外驗(yàn)證USC-exos對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HuVECs的促進(jìn)增殖、遷移、成管的作用。(3)在體外構(gòu)建USC-Exos-piGEL復(fù)合體,...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫詞對照表
緒論
第一部分 尿源性干細(xì)胞外泌體的分離與鑒定
    1.1 材料與方法
        1.1.1 材料與儀器
        1.1.2 尿源性干細(xì)胞(USC)的分離與培養(yǎng)
        1.1.3 尿源性干細(xì)胞外泌體(USC-Exos)的分離
        1.1.4 USC-Exos的形態(tài)、粒徑測定
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 TEM電鏡下USC-Exos的形態(tài)特征
        1.2.2 qNANO檢測USC-Exos的粒徑和濃度
    1.3 本節(jié)結(jié)論與討論
第二部分 尿源性干細(xì)胞外泌體體外促進(jìn)血管再生
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料與儀器
        2.1.2 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HuVECs)的培養(yǎng)
        2.1.3 USC-Exos促進(jìn)HuVECs增殖作用
        2.1.4 USC-Exos促進(jìn)HuVECs遷移作用
        2.1.5 USC-Exos促進(jìn)HuVECs成管作用
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 USC-Exos體外促進(jìn)HuVECs增殖
        2.2.2 USC-Exos體外促進(jìn)HuVECs遷移
        2.2.3 USC-Exos體外促進(jìn)HuVECs成管
    2.3 本節(jié)結(jié)論與討論
第三部分 光致亞胺交聯(lián)凝膠(piGEL)制備及凝膠-外泌體復(fù)合體(USC-Exos-piGEL)的構(gòu)建
    3.1 材料與方法
        3.1.1 USC-Exos-piGEL的制備
        3.1.2 USC-Exos-piGEL體外釋放外泌體濃度測定
    3.2 結(jié)果
    3.3 本節(jié)結(jié)論與討論
第四部分 USC-Exos-piGEL體內(nèi)促進(jìn)股骨骨不連修復(fù)
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料與儀器
        4.1.2 大鼠股骨骨不連模型建立與干預(yù)
        4.1.3 影像學(xué)評估股骨骨不連修復(fù)情況
        4.1.4 血管灌注法評估股骨骨不連周圍血供再生情況
        4.1.5 組織學(xué)評估股骨骨不連修復(fù)情況
        4.1.6 組織切片免疫熒光評估骨不連周圍血管再生情況
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 影像學(xué)評估大鼠股骨骨不連修復(fù)情況
        4.2.2 血管灌注法評估股骨骨不連周圍血供再生情況
        4.2.3 組織學(xué)評估股骨骨不連修復(fù)情況
        4.2.4 股骨肥大型骨不連修復(fù)的免疫組織化學(xué)表現(xiàn)
    4.3 本節(jié)結(jié)論與討論
討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間論文發(fā)表情況及獲獎(jiǎng)情況



本文編號：3821288