背景:骨不連是創(chuàng)傷骨科中困擾臨床的并發(fā)癥之一,目前自體骨移植等臨床主要治療方法的治愈率難以令人滿意,嚴重影響患者的生活質(zhì)量。近年來隨著組織工程技術研究的深入,干細胞療法受到越來越多的關注,但仍有倫理、致畸等風險。外泌體是細胞分泌的囊泡,內(nèi)含核酸、蛋白質(zhì)等物質(zhì)以完成細胞間信息傳遞,研究證實外泌體可以發(fā)揮與源細胞類似的作用。本研究借助一種與骨組織有特殊親和力的水凝膠(piGEL)為載體,搭載尿源性干細胞來源的外泌體(USC-Exos),構成凝膠外泌體復合體(USC-Exos-piGEL)通過體內(nèi)體外實驗驗證該復合體對骨不連的治療效果。方法:本研究利用課題組前期建立的實驗技術,從人尿液中提取并培養(yǎng)尿源性干細胞(USC),通過超濾法提取其分泌的外泌體(USC-exos)用于研究。(1)通過TEM觀察USC-exos的形態(tài)、大小,通過qNANO技術測定外泌體粒徑和外泌體懸液的濃度。(2)通過CCK-8細胞增殖實驗、劃痕實驗、transwell實驗、成管實驗在體外驗證USC-exos對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞HuVECs的促進增殖、遷移、成管的作用。(3)在體外構建USC-Exos-piGEL復合體,...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫詞對照表
緒論
第一部分 尿源性干細胞外泌體的分離與鑒定
    1.1 材料與方法
        1.1.1 材料與儀器
        1.1.2 尿源性干細胞(USC)的分離與培養(yǎng)
        1.1.3 尿源性干細胞外泌體(USC-Exos)的分離
        1.1.4 USC-Exos的形態(tài)、粒徑測定
    1.2 結果
        1.2.1 TEM電鏡下USC-Exos的形態(tài)特征
        1.2.2 qNANO檢測USC-Exos的粒徑和濃度
    1.3 本節(jié)結論與討論
第二部分 尿源性干細胞外泌體體外促進血管再生
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料與儀器
        2.1.2 人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HuVECs)的培養(yǎng)
        2.1.3 USC-Exos促進HuVECs增殖作用
        2.1.4 USC-Exos促進HuVECs遷移作用
        2.1.5 USC-Exos促進HuVECs成管作用
    2.2 結果
        2.2.1 USC-Exos體外促進HuVECs增殖
        2.2.2 USC-Exos體外促進HuVECs遷移
        2.2.3 USC-Exos體外促進HuVECs成管
    2.3 本節(jié)結論與討論
第三部分 光致亞胺交聯(lián)凝膠(piGEL)制備及凝膠-外泌體復合體(USC-Exos-piGEL)的構建
    3.1 材料與方法
        3.1.1 USC-Exos-piGEL的制備
        3.1.2 USC-Exos-piGEL體外釋放外泌體濃度測定
    3.2 結果
    3.3 本節(jié)結論與討論
第四部分 USC-Exos-piGEL體內(nèi)促進股骨骨不連修復
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料與儀器
        4.1.2 大鼠股骨骨不連模型建立與干預
        4.1.3 影像學評估股骨骨不連修復情況
        4.1.4 血管灌注法評估股骨骨不連周圍血供再生情況
        4.1.5 組織學評估股骨骨不連修復情況
        4.1.6 組織切片免疫熒光評估骨不連周圍血管再生情況
    4.2 結果
        4.2.1 影像學評估大鼠股骨骨不連修復情況
        4.2.2 血管灌注法評估股骨骨不連周圍血供再生情況
        4.2.3 組織學評估股骨骨不連修復情況
        4.2.4 股骨肥大型骨不連修復的免疫組織化學表現(xiàn)
    4.3 本節(jié)結論與討論
討論
全文結論
參考文獻
致謝
碩士期間論文發(fā)表情況及獲獎情況



本文編號：3821288