目的:探討容積敏感性LRRC8A氯離子通道在正常和OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá)情況,分析LRRC8A離子通道的激活和表達(dá)水平對(duì)及II型膠原蛋白表達(dá)的影響,為氯離子通道型的抗骨性關(guān)節(jié)炎藥物的研發(fā)提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:從患者術(shù)后的股骨頭和膝關(guān)節(jié)中提取相對(duì)正常的軟骨細(xì)胞和骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞,甲苯胺藍(lán)染色初步鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞是否為軟骨細(xì)胞。通過(guò)q PCR和免疫熒光實(shí)驗(yàn)比較股骨頸骨折患者和骨性關(guān)節(jié)炎患者的軟骨細(xì)胞中COL II和LRRC8A氯通道的m RNA水平。使用氯離子通道阻斷劑NPPB、LRRC8A-si RNA和不同滲透壓培養(yǎng)液分別處理軟骨細(xì)胞后,檢測(cè)COL II和LRRC8A基因的m RNA水平。結(jié)果:從患者處獲得的軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性,初步鑒定我們所培養(yǎng)的細(xì)胞為軟骨細(xì)胞。股骨頸骨折患者軟骨細(xì)胞COL II mRNA和LRRC8A mRNA表達(dá)量分別為(1.004±0.082)、(1.002±0.057)。OA患者軟骨細(xì)胞中COL II、LRRC8A基因m RNA水平分別為對(duì)照組的(0.27±0.06)倍、(1.998±0.141)倍。OA患者軟骨細(xì)胞中COL II基因m R...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.3 本實(shí)驗(yàn)研究的內(nèi)容和意義
第2章 材料與試劑
    2.1 軟骨細(xì)胞
    2.2 試劑及耗材
    2.3 主要儀器
    2.4 試劑的配制
第3章 方法
    3.1 軟骨細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
    3.2 LRRC8A-siRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.3 免疫熒光染色
    3.4 軟骨細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色鑒定
    3.5 對(duì)軟骨細(xì)胞進(jìn)行不同滲透壓培養(yǎng)
    3.6 使用NPPB阻斷軟骨細(xì)胞中氯離子通道
    3.7 RT-qPCR
    3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 培養(yǎng)后的軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色鑒定
    4.2 正常軟骨細(xì)胞和OA軟骨細(xì)胞中COL II基因的表達(dá)差異
    4.3 LRRC8A氯離子通道在正常軟骨細(xì)胞和OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá)差異
    4.4 氯通道阻滯劑處理后,軟骨細(xì)胞COL II基因mRNA減少
    4.5 不同滲透壓培養(yǎng)下軟骨細(xì)胞基因的表達(dá)差異
    4.6 LRRC8A-siRNA轉(zhuǎn)染后,軟骨細(xì)胞相關(guān)基因的mRNA表達(dá)差異
    4.7 調(diào)節(jié)滲透壓和使用NPPB阻斷氯通道后,軟骨細(xì)胞COLⅡ基因的mRNA表達(dá)差異
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3814178