目的:探討容積敏感性LRRC8A氯離子通道在正常和OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá)情況,分析LRRC8A離子通道的激活和表達(dá)水平對及II型膠原蛋白表達(dá)的影響,為氯離子通道型的抗骨性關(guān)節(jié)炎藥物的研發(fā)提供新的實驗依據(jù)。方法:從患者術(shù)后的股骨頭和膝關(guān)節(jié)中提取相對正常的軟骨細(xì)胞和骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞,甲苯胺藍(lán)染色初步鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞是否為軟骨細(xì)胞。通過q PCR和免疫熒光實驗比較股骨頸骨折患者和骨性關(guān)節(jié)炎患者的軟骨細(xì)胞中COL II和LRRC8A氯通道的m RNA水平。使用氯離子通道阻斷劑NPPB、LRRC8A-si RNA和不同滲透壓培養(yǎng)液分別處理軟骨細(xì)胞后,檢測COL II和LRRC8A基因的m RNA水平。結(jié)果:從患者處獲得的軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色實驗結(jié)果為陽性,初步鑒定我們所培養(yǎng)的細(xì)胞為軟骨細(xì)胞。股骨頸骨折患者軟骨細(xì)胞COL II mRNA和LRRC8A mRNA表達(dá)量分別為(1.004±0.082)、(1.002±0.057)。OA患者軟骨細(xì)胞中COL II、LRRC8A基因m RNA水平分別為對照組的(0.27±0.06)倍、(1.998±0.141)倍。OA患者軟骨細(xì)胞中COL II基因m R...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.3 本實驗研究的內(nèi)容和意義
第2章 材料與試劑
    2.1 軟骨細(xì)胞
    2.2 試劑及耗材
    2.3 主要儀器
    2.4 試劑的配制
第3章 方法
    3.1 軟骨細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
    3.2 LRRC8A-siRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.3 免疫熒光染色
    3.4 軟骨細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色鑒定
    3.5 對軟骨細(xì)胞進(jìn)行不同滲透壓培養(yǎng)
    3.6 使用NPPB阻斷軟骨細(xì)胞中氯離子通道
    3.7 RT-qPCR
    3.8 統(tǒng)計學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 培養(yǎng)后的軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色鑒定
    4.2 正常軟骨細(xì)胞和OA軟骨細(xì)胞中COL II基因的表達(dá)差異
    4.3 LRRC8A氯離子通道在正常軟骨細(xì)胞和OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá)差異
    4.4 氯通道阻滯劑處理后,軟骨細(xì)胞COL II基因mRNA減少
    4.5 不同滲透壓培養(yǎng)下軟骨細(xì)胞基因的表達(dá)差異
    4.6 LRRC8A-siRNA轉(zhuǎn)染后,軟骨細(xì)胞相關(guān)基因的mRNA表達(dá)差異
    4.7 調(diào)節(jié)滲透壓和使用NPPB阻斷氯通道后,軟骨細(xì)胞COLⅡ基因的mRNA表達(dá)差異
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3814178