目的:利用冷凍干燥法,將包載音猬因子(sonic hedeghog,SHH)的殼聚糖(chitosan,CS)微球填充于纖維蛋白膠(fibrin glue,Fg),構(gòu)建具有三維結(jié)構(gòu)的復(fù)合生物工程支架,并探討該支架對外胚層間充質(zhì)干細胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs)增殖與分化的影響;建立大鼠脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)模型,移植EMSCs與復(fù)合纖維蛋白支架至脊髓損傷處,評價大鼠脊髓損傷修復(fù)的效果。方法:(1)首先離子凝膠法制備包載SHH的殼聚糖微球,而后將其與纖維蛋白膠混合,冷凍干燥成型,即得到包埋載SHH殼聚糖微球的纖維蛋白支架(Fg-CS-SHH),然后采用掃描電子顯微鏡和ELISA分別觀察支架微觀結(jié)構(gòu)和SHH緩釋效果,并制備包載SHH的纖維蛋白支架(FG-SHH)和包載SHH的殼聚糖支架(CS-SHH)作為對照;(2)取健康SD大鼠鼻粘膜組織,培養(yǎng)原代EMSCs并傳代擴增。將第三代EMSCs通過懸浮抗貼壁法培養(yǎng)EMSCs來源的神經(jīng)球樣細胞,用免疫熒光法鑒定其表面標志蛋白。(3)將EMSCs來源的神經(jīng)球分別種植于上述支架...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮寫詞表
緒論
    1.研究背景
    2.研究目標
第一章 包埋載SHH殼聚糖微球的纖維蛋白支架的構(gòu)建
    1 實驗材料
        1.1 實驗試劑
        1.2 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 殼聚糖微球(CS-SHH)、纖維蛋白凝膠支架(FG-SHH)的制備
        2.2 復(fù)合纖維蛋白支架(FG-CS-SHH)的制備
        2.3 復(fù)合纖維蛋白支架的緩釋動力學(xué)測定
        2.4 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 微球及支架的形態(tài)
        3.2 微球及支架的緩釋性能
第二章 外胚層間充質(zhì)干細胞及其來源的神經(jīng)球的培養(yǎng)和鑒定
    1 實驗材料
        1.1 實驗試劑
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗動物
    2 實驗方法
        2.1 外胚層間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)及傳代
        2.2 EMSCs的干細胞特性鑒定
        2.3 EMSCs來源的神經(jīng)球的培養(yǎng)
        2.4 EMSCs來源的神經(jīng)球的表面標志蛋白鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 EMSCs的形態(tài)學(xué)和表面標志鑒定
        3.2 EMSCs來源的神經(jīng)球的形態(tài)學(xué)和表面標志鑒定
第三章 FG-CS-SHH對EMSCs增殖與分化的影響
    1 實驗材料
        1.1 實驗試劑
        1.2 實驗儀器
        1.3 工作液配置
    2 實驗方法
        2.1 FG-CS-SHH對EMSCs來源的神經(jīng)球的的誘導(dǎo)
        2.2 MTT檢測FG-CS-SHH對EMSCs增殖的影響
        2.3 免疫熒光檢測FG-CS-SHH對EMSCs分化的影響
        2.4 Western blot檢測FG-CS-SHH對EMSCs分化的影響
        2.5 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 支架對EMSCs的體外生物相容性
        3.2 支架中神經(jīng)再生相關(guān)蛋白的免疫熒光檢測
        3.3 支架中神經(jīng)再生相關(guān)蛋白的免疫印跡檢測
第四章 大鼠脊髓橫斷損傷模型的建立
    1 實驗材料
        1.1 實驗器材
        1.2 實驗動物
    2 實驗方法
    3 結(jié)果
第五章 移植FG-CS-SHH促大鼠脊髓橫斷損傷修復(fù)的效果評價
    1 實驗材料
        1.1 實驗試劑
        1.2 試驗儀器
        1.3 工作液配置
    2 實驗方法
        2.1 下肢運動功能評分
        2.2 HE染色和免疫組織化學(xué)染色檢測脊髓橫斷損傷修復(fù)的效果
            2.2.1 脊髓組織樣本的制備
            2.2.2 冰凍切片及HE染色
            2.2.3 免疫組織化學(xué)染色
        2.3 Western blot法檢測脊髓橫斷損傷修復(fù)的效果
        2.4 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 大鼠下肢運動功能評分
        3.2 脊髓損傷平面組織形態(tài)學(xué)分析
        3.3 免疫印跡檢測脊髓組織中的神經(jīng)再生相關(guān)蛋白
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述 神經(jīng)營養(yǎng)因子治療脊髓損傷的研究進展
    參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文



本文編號：3777354