目的:研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)分泌的CXCL-1促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用并闡明其相關(guān)分子機(jī)制和探討消癖顆粒抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用,為預(yù)防和治療乳腺癌提供新策略。方法:1.通過Cytokine array實(shí)驗(yàn),篩選TAMs細(xì)胞高表達(dá)的細(xì)胞因子,并利用免疫組化實(shí)驗(yàn),在MMTV-Pyvt+/-轉(zhuǎn)基因荷瘤小鼠中比較轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)灶中CXCL-1和轉(zhuǎn)移相關(guān)指標(biāo)(EMT)的表達(dá)差異。2.利用MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、明膠酶譜實(shí)驗(yàn)、Western blot實(shí)驗(yàn)探討cxcl-1是否影響乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移侵襲能力。3.利用Q-PCR技術(shù)篩選出CXCL-1作用于乳腺癌細(xì)胞的靶基因,利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒轉(zhuǎn)染等沉默或重組相關(guān)基因,Western blot實(shí)驗(yàn)、免疫熒光等手段驗(yàn)證相關(guān)通路。4.在體內(nèi),活體成像技術(shù)觀察TAMs分泌的CXCL-1對(duì)Nod-scid小鼠肺轉(zhuǎn)移的作用,觀察小鼠乳腺癌腫瘤生長(zhǎng)的作用,免疫熒光和免疫組化技術(shù)觀察相關(guān)蛋白的表達(dá)。5.人乳腺癌組織芯片驗(yàn)證CXCL-1與乳腺癌病人生存期等的關(guān)系。6.通過Cytokine array實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證消癖顆粒的作用靶點(diǎn)。7.劃痕實(shí)驗(yàn)...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)研究和研究背景
    1.1 乳腺癌的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 流行病學(xué)及病因?qū)W研究
        1.1.2 臨床癥狀及檢查
        1.1.3 治療現(xiàn)狀
            1.1.3.1 外科治療
            1.1.3.2 非手術(shù)治療
    1.2 腫瘤微環(huán)境和腫瘤巨噬細(xì)胞與腫瘤的關(guān)系
    1.3 細(xì)胞因子與腫瘤的關(guān)系
    1.4 CXCL1與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制的研究
    1.5 消癖顆粒的研究基礎(chǔ)
第二章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和中藥
        2.1.3 主要試劑及耗材
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 體外實(shí)驗(yàn)
            2.2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.1.2 western blot
            2.2.1.3 細(xì)胞因子陣列實(shí)驗(yàn)Cytokin array assay
            2.2.1.4 明膠酶譜實(shí)驗(yàn)
            2.2.1.5 劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.2.1.6 Transwell實(shí)驗(yàn)
            2.2.1.7 免疫熒光、激光共聚焦
            2.2.1.8 細(xì)胞流式
            2.2.1.9 q-PCR
            2.2.1.10 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
                2.2.1.10.1 病毒轉(zhuǎn)染
                2.2.1.10.2 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
                2.2.1.10.3 siRNA瞬轉(zhuǎn)
                2.2.1.10.4 MTT增殖實(shí)驗(yàn)
            2.2.1.11 消癖顆粒制備
        2.2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
            2.2.2.1 動(dòng)物造模
            2.2.2.2 HE染色
            2.2.2.3 免疫組化、免疫熒光
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 TAMs高表達(dá)CXCL1且肺轉(zhuǎn)移灶中CXCL1高表達(dá)
        3.1.1 TAMs中高表達(dá)CXCL1
        3.1.2 轉(zhuǎn)基因小鼠模型中肺轉(zhuǎn)移灶CXCL1表達(dá)顯著增強(qiáng)
    3.2 CXCL1介導(dǎo)乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用
        3.2.1 CXCL1促進(jìn)鼠源乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移
        3.2.2 CXCL1促進(jìn)人乳腺癌轉(zhuǎn)移
    3.3 SOX4可能是乳腺癌轉(zhuǎn)移中CXCL1最重要的下游靶點(diǎn)
    3.4 CXCL1通過SOX4影響乳腺癌轉(zhuǎn)移
    3.5 CXCL1介導(dǎo)NF-Kb/SOX4通路影響乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)指標(biāo)
    3.6 TAMs-CXCL1對(duì)Nod-scid小鼠乳腺癌原位瘤和肺轉(zhuǎn)移瘤的影響
        3.6.1 TAMs-CXCL1促進(jìn)小鼠乳腺癌原位瘤作用
        3.6.2 TAMs-CXCLl促進(jìn)小鼠肺轉(zhuǎn)移
    3.7 臨床分析
        3.7.1 CXCL1影響術(shù)后病人的生存期
        3.7.2 CXCL1對(duì)臨床指標(biāo)的影響
    3.8 消癖顆粒通過TAMS/CXCL1抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移侵襲能力
        3.8.1 消癖顆粒的作用靶點(diǎn)是TAMs/CXCL1
        3.8.2 消癖顆粒抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移侵襲能力
第四章 討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間發(fā)表論文情況
致謝
統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明



本文編號(hào)：3737663