研究背景大面積皮膚組織缺損是整形外科修復(fù)的難點問題。目前修復(fù)缺損方法包括皮片移植、皮瓣移植、異體復(fù)合組織移植以及皮膚軟組織擴張術(shù)等方法。然而,移植皮片顏色、質(zhì)地與受區(qū)差異較大,移植皮片后期常常發(fā)生攣縮,取皮部位還可能遺留明顯瘢痕;局部皮瓣轉(zhuǎn)移雖能提供與受區(qū)相似的皮膚組織,但局部皮瓣難以獲取足夠組織修復(fù)較大創(chuàng)面;同種異體血管化復(fù)合組織移植例如顏面移植、手移植等雖然能一次性提供與受區(qū)形狀、結(jié)構(gòu)、質(zhì)地相似的組織,但該方法技術(shù)難度大,且術(shù)后長期使用的免疫抑制劑所帶來的毒副作用也限制了其推廣。皮膚軟組織擴張術(shù)作為整形外科常規(guī)的技術(shù)之一,在臨床應(yīng)用廣泛。擴張術(shù)能提供與受區(qū)顏色、質(zhì)地相似的“額外”皮膚組織,并且不對供區(qū)造成繼發(fā)損害。盡管如此,擴張術(shù)依然存在一系列問題,如皮膚擴張效率不佳、手術(shù)周期長、手術(shù)并發(fā)癥相對較多、擴張機制研究不清等問題。因此,進一步研究在機械應(yīng)力作用下擴張皮膚新生機制十分必要。皮膚的擴張過程,類似一種組織反復(fù)損傷、修復(fù)的過程。組織損傷后,免疫細胞尤其是單核/巨噬細胞會遷移到損傷部位,參與壞死細胞的清除以及組織修復(fù)與再生。根據(jù)表型以及功能的不同,巨噬細胞可以分為M1型巨噬細胞以及... 

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻回顧
第一部分 皮膚擴張過程中巨噬細胞數(shù)量及亞型變化
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
        1.4 實驗試劑配制
    2 方法
        2.1 大鼠背部擴張模型構(gòu)建
        2.2 實驗動物分組
        2.3 擴張皮膚組織化學染色
        2.4 擴張皮膚與正常皮膚總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.5 擴張皮膚M1、M2 相關(guān)細胞因子qPCR分析
        2.6 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 SD大鼠背部擴張模型的建立及大體觀察
        3.2 擴張皮膚HE染色
        3.3 擴張皮膚CD68 免疫組化染色
        3.4 免疫熒光探究在擴張過程中皮膚巨噬細胞數(shù)量變化
        3.5 擴張過程中皮膚M1、M2 型巨噬細胞動態(tài)變化
        3.6 擴張皮膚包膜中巨噬細胞數(shù)量及亞型動態(tài)變化
        3.7 擴張皮膚M1、M2 相關(guān)細胞因子qPCR檢測
    4 討論
第二部分 巨噬細胞在擴張過程中作用及其機制研究
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
        1.4 實驗試劑的配制
    2 方法
        2.1 大鼠擴張皮瓣局部巨噬細胞耗竭模型構(gòu)建
        2.2 巨噬細胞耗竭對于擴張皮膚新生/再生的影響
        2.3 巨噬細胞耗竭擴張皮膚、對照皮膚以及正常皮膚RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.4 巨噬細胞耗竭擴張皮膚、對照擴張皮膚中生長因子PCR檢測
        2.5 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 成功構(gòu)建擴張皮瓣局部巨噬細胞耗竭模型
        3.2 巨噬細胞耗竭后擴張皮膚新生面積減少
        3.3 巨噬細胞耗竭后擴張皮膚厚度變薄
        3.4 巨噬細胞耗竭后擴張皮膚真皮膠原合成減少
        3.5 巨噬細胞耗竭后擴張皮膚并發(fā)癥情況
        3.6 巨噬細胞耗竭后擴張皮膚增殖活躍細胞減少
        3.7 巨噬細胞耗竭后擴張皮膚血管化變差
        3.8 巨噬細胞耗竭后局部生長因子水平降低
    4 討論
第三部分 體外實驗探究巨噬細胞極化后相關(guān)作用
    1 材料
        1.1 細胞系及實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
        1.4 實驗試劑
    2 方法
        2.1 巨噬細胞極化誘導
        2.2 流式細胞術(shù)檢測巨噬細胞極化
        2.3 胎鼠成纖維細胞(Mouse embryo fibroblast,MEF)獲取
        2.4 M1、M2 型巨噬細胞上清對胎鼠成纖維細胞膠原合成的影響
        2.5 qPCR檢測M1、M2 型巨噬細胞生長因子水平
        2.6 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 264.7細胞成功誘導為M1 以及M2 型巨噬細胞
        3.2 巨噬細胞極化后生長因子表達情況
        3.3 M2 型巨噬細胞上清促進胎鼠成纖維細胞膠原合成
    4 討論
小結(jié)
參考文獻
附錄
個人簡歷和研究成果
致謝



本文編號：3734214