目的:1.制作不同硬度的生物相容性丙烯酰胺水凝膠及測試其力學性能;2.探明MRTF-A在不同硬度梯度條件下對骨肉瘤MG63細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象的影響;3.驗證基質(zhì)硬度通過MRTF-A調(diào)控骨肉瘤MG63細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的具體信號通路及機制。方法:1.合成不同硬度的聚丙烯酰胺水凝膠,并用Instron萬能力學測試儀進行檢測確認;通過CCK8法檢測水凝膠對細胞增殖的影響;通過光鏡和熒光顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化,確認水凝膠體系的建立和可重復性。2.通過鈣黃綠素染色定量細胞圓度的變化,同時使用免疫熒光確認細胞骨架的重塑和MRTF-A的核轉(zhuǎn)位;通過蛋白印跡實驗檢測不同硬度下MRTF-A及EMT的各蛋白和轉(zhuǎn)錄因子的改變,同時在使用MRTF-A抑制劑干預后觀察其核轉(zhuǎn)位及各蛋白和轉(zhuǎn)錄因子的變化,從而了解MRTF-A在骨肉瘤細胞EMT過程中發(fā)揮的作用;使用細胞刮痕實驗及蛋白印跡實驗確認骨肉瘤EMT現(xiàn)象在不同硬度及抑制劑干預下的變化。3.通過蛋白印跡實驗檢測基質(zhì)硬度通過MRTF-A調(diào)控EMT現(xiàn)象的信號通路,并驗證基質(zhì)硬度與經(jīng)典TGF-β/Smad信號通路之間的關(guān)系。結(jié)果:1.聚丙烯酰胺水凝膠可以通過丙烯酰胺... 

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
華中科技大學博士學位論文創(chuàng)新點概述
中文摘要
ABSTRACT
第一部分 不同硬度梯度生物相容性聚丙烯酰胺水凝膠體系的構(gòu)建
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
第二部分 細胞外基質(zhì)硬度通過MRTF-A調(diào)節(jié)骨肉瘤細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
第三部分 MRTF-A調(diào)控骨肉瘤細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機制研究
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
總結(jié)
綜述
    參考文獻
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 攻讀博士學位期間發(fā)表的論文以及參與的課題
致謝



本文編號：3701554