目的:1.制作不同硬度的生物相容性丙烯酰胺水凝膠及測(cè)試其力學(xué)性能;2.探明MRTF-A在不同硬度梯度條件下對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象的影響;3.驗(yàn)證基質(zhì)硬度通過MRTF-A調(diào)控骨肉瘤MG63細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的具體信號(hào)通路及機(jī)制。方法:1.合成不同硬度的聚丙烯酰胺水凝膠,并用Instron萬(wàn)能力學(xué)測(cè)試儀進(jìn)行檢測(cè)確認(rèn);通過CCK8法檢測(cè)水凝膠對(duì)細(xì)胞增殖的影響;通過光鏡和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,確認(rèn)水凝膠體系的建立和可重復(fù)性。2.通過鈣黃綠素染色定量細(xì)胞圓度的變化,同時(shí)使用免疫熒光確認(rèn)細(xì)胞骨架的重塑和MRTF-A的核轉(zhuǎn)位;通過蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同硬度下MRTF-A及EMT的各蛋白和轉(zhuǎn)錄因子的改變,同時(shí)在使用MRTF-A抑制劑干預(yù)后觀察其核轉(zhuǎn)位及各蛋白和轉(zhuǎn)錄因子的變化,從而了解MRTF-A在骨肉瘤細(xì)胞EMT過程中發(fā)揮的作用;使用細(xì)胞刮痕實(shí)驗(yàn)及蛋白印跡實(shí)驗(yàn)確認(rèn)骨肉瘤EMT現(xiàn)象在不同硬度及抑制劑干預(yù)下的變化。3.通過蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)基質(zhì)硬度通過MRTF-A調(diào)控EMT現(xiàn)象的信號(hào)通路,并驗(yàn)證基質(zhì)硬度與經(jīng)典TGF-β/Smad信號(hào)通路之間的關(guān)系。結(jié)果:1.聚丙烯酰胺水凝膠可以通過丙烯酰胺... 

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文創(chuàng)新點(diǎn)概述
中文摘要
ABSTRACT
第一部分 不同硬度梯度生物相容性聚丙烯酰胺水凝膠體系的構(gòu)建
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 細(xì)胞外基質(zhì)硬度通過MRTF-A調(diào)節(jié)骨肉瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 MRTF-A調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
總結(jié)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文以及參與的課題
致謝



本文編號(hào)：3701554