外泌體（Exosomes）是由細(xì)胞分泌產(chǎn)生的膜囊泡,負(fù)載豐富生物活性分子（protein,lipid,RNA）^[1-3]。外泌體具有低免疫原性、較長(zhǎng)的半衰期和穿過血腦屏障（BBB）的能力,能傳播到體液并到達(dá)遠(yuǎn)處的組織,可以在生物標(biāo)志物、治療性載體等幾個(gè)不同臨床范圍得到應(yīng)用^[4-7]。間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）可以產(chǎn)生大量的外泌體^[8]。MSCs分泌具有強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)活性的生物活性因子、抑制纖維化和凋亡,增強(qiáng)血管生成并促進(jìn)神經(jīng)元存活和分化^[9],因此被大量用來進(jìn)行神經(jīng)修復(fù)。目前研究表明MSCs治療效果可能主要是通過產(chǎn)生的外泌體發(fā)揮作用^[10-13]。因此,MSCs-exosomes有望成為一種新興的治療工具。胎盤組織中的間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量較多,易于培養(yǎng),而且具有大量增值的能力,并且具有產(chǎn)生豐富外泌體的能力,其具備臨床應(yīng)用價(jià)值。在本論文中,我們首先從足月胎兒胎盤組織中分離獲了MSCs,并能夠穩(wěn)定長(zhǎng)期傳代,流式分析結(jié)果顯示MSCs表達(dá)間質(zhì)類細(xì)胞表... 

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語索引
第一章 緒論
    1.1 研究目的與意義
    1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的特性及展望
    1.3 外泌體與疾病
    1.4 脊髓損傷
    1.5 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3研究進(jìn)展
第二章 間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所有儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的分離
        2.2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.2.3 間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.2.4 間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存
        2.2.5 間充質(zhì)干細(xì)胞的分化
        2.2.6 間充質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)
        2.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)hPMSCs的免疫表型
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)結(jié)果
        2.3.2 人胎盤來源間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)特性
        2.3.3 流式細(xì)胞儀鑒定hPMSCs免疫表型
        2.3.4 hPMSc成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化
    2.4 小結(jié)
第三章 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的純化與鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)培養(yǎng)
        3.2.2 復(fù)蘇的間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)
        3.2.3 外泌體的純化
        3.2.4 BCA法測(cè)定外泌體蛋白濃度
        3.2.5 Western Blot鑒定外泌體蛋白
        3.2.6 透射電子顯微鏡鑒定外泌體結(jié)構(gòu)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 透射電鏡下觀察外泌體的結(jié)構(gòu)
        3.3.2 Western Blot鑒定
        3.3.3 BCA測(cè)定外泌體蛋白的濃度
    3.4 小結(jié)
第四章 外泌體對(duì)脊髓損傷后的修復(fù)作用
    引言
    4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
        4.3.2 大鼠脊髓背部全橫斷模型制備
        4.3.3 大鼠行為學(xué)評(píng)估
        4.3.4 免疫熒光染色
        4.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 外泌體的處理促進(jìn)損傷脊髓再生
        4.4.2 外泌體能夠改善脊髓損傷大鼠的神經(jīng)性疼痛和膀胱功能障礙
        4.4.3 外泌體通過促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的再生達(dá)到修復(fù)損傷的神經(jīng)功能
    4.5 小結(jié)
第五章 間充質(zhì)干細(xì)胞過表達(dá)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3
    引言
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 NT3過表達(dá)技術(shù)路線
        5.2.2 人源NT-3基因克隆
        5.2.3 pLVX-EF1a-IRES-meCherry-NT-3載體的構(gòu)建
        5.2.4 慢病毒包裝
        5.2.5 細(xì)胞感染
        5.2.6 病毒的感染效率
        5.2.7 過表達(dá)NT-3細(xì)胞鑒定
        5.2.8 細(xì)胞流式分選
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry質(zhì)粒載體構(gòu)建
        5.3.2 pLVX-EF1a-IRES-NT-3-meCherry質(zhì)粒載體的表達(dá)
    5.4 小結(jié)
第六章 結(jié)論與討論
第七章 展望與挑戰(zhàn)
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄



本文編號(hào)：3701278