研究目的:運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷或者退行性病變是運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病或者脊髓損傷常見的病理特征。移植運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元被認(rèn)為是一種有望促進(jìn)脊髓功能恢復(fù)的治療手段。之外,獲得運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病患者的特異性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元可作為疾病模型研究運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病的發(fā)病機(jī)制、篩選和評(píng)估新的治療藥物等。然而目前缺乏一種高效、安全地獲得運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的方法。本研究篩選小分子化合物誘導(dǎo)體細(xì)胞直轉(zhuǎn)分化運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。方法:根據(jù)對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元發(fā)育過程的認(rèn)識(shí),選擇一些小分子化合物,采取不同的小分子組合來誘導(dǎo)人星形膠質(zhì)細(xì)胞HA1800。通過細(xì)胞形態(tài)、免疫熒光染色、基因表達(dá)和電生理等鑒定誘導(dǎo)的細(xì)胞是否具有神經(jīng)元的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的表型以及電生理特性,并識(shí)別有效的小分子化合物組合。進(jìn)一步研究有效的小分子組合能否誘導(dǎo)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞、人和小鼠的成纖維細(xì)胞、人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。最后,探索小分子在體內(nèi)能否誘導(dǎo)產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。將小分子包含在beads內(nèi),移植到小鼠背部皮下或者大鼠坐骨神經(jīng)周圍,通過免疫熒光分析小分子能否誘導(dǎo)beads周圍的細(xì)胞轉(zhuǎn)分化運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。結(jié)果:篩選出五個(gè)小分子化合物的組合,它能夠?qū)⑷诵切文z質(zhì)細(xì)胞高效、快速、直接轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)/符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、小分子化合物誘導(dǎo)人和小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 主要儀器和耗材
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要細(xì)胞和動(dòng)物
        1.1.4 主要溶液、緩沖液、培養(yǎng)基配置
        1.1.5 人正常星形膠質(zhì)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、凍存和鑒定
        1.1.6 神經(jīng)球形成實(shí)驗(yàn)
        1.1.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)
        1.1.8 小分子化合物誘導(dǎo)HA1800向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化
        1.1.9 共聚焦時(shí)序拍照
        1.1.10 采用差速貼壁法分離、培養(yǎng)新生大鼠成肌細(xì)胞
        1.1.11 成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化和誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元共培養(yǎng)
        1.1.12 膜片鉗技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)神經(jīng)元的神經(jīng)電生理活動(dòng)
        1.1.13 小分子誘導(dǎo)ALS模型小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞
        1.1.14 細(xì)胞免疫熒光分析
        1.1.15 細(xì)胞總RNA提取
        1.1.16 RealtimePCR反應(yīng)
        1.1.17 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 人星形膠質(zhì)細(xì)胞HA1800鑒定
        1.2.2 篩選小分子化合物誘導(dǎo)HA1800向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化
        1.2.3 小分子化合物誘導(dǎo)神經(jīng)元的過程并不經(jīng)歷增殖的神經(jīng)干/祖細(xì)胞中間狀態(tài)
        1.2.4 小分子誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞基因表達(dá)發(fā)生明顯改變
        1.2.5 誘導(dǎo)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的具有神經(jīng)元電生理活動(dòng)特征
        1.2.6 誘導(dǎo)的神經(jīng)元控制肌管的收縮
        1.2.7 小分子化合物誘導(dǎo)ALS模型小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞變成運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、小分子化合物誘導(dǎo)人和小鼠成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 主要儀器和耗材
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要細(xì)胞和動(dòng)物
        2.1.4 主要溶液、緩沖液和培養(yǎng)基配置
        2.1.5 成人皮膚成纖維細(xì)胞(HSF)分離、培養(yǎng)
        2.1.6 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(Mouseembryonicfibroblasts,MEF)分離、培養(yǎng)
        2.1.7 小分子化合物誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
        2.1.8 小分子化合物誘導(dǎo)新生兒皮膚成纖維細(xì)胞和成人皮膚成纖維細(xì)胞
        2.1.9 小分子誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化
        2.1.10 細(xì)胞免疫熒光
        2.1.11 細(xì)胞總RNA提取
        2.1.12 RealtimeqPCR分析
        2.1.13 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 鑒定人胚肺成纖維細(xì)胞IMR-90的表型
        2.2.2 小分子化合物誘導(dǎo)IMR-90變成運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
        2.2.3 小分子誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元不經(jīng)歷神經(jīng)干/祖細(xì)胞中間狀態(tài)
        2.2.4 小分子誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞的基因表達(dá)發(fā)生改變
        2.2.5 小分子化合物誘導(dǎo)新生兒皮膚成纖維細(xì)胞和成人皮膚成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
        2.2.6 小分子化合物誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞變成運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、小分子化合物誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
    3.1 對(duì)象和方法
        3.1.1 主要儀器和耗材
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要的細(xì)胞
        3.1.4 主要溶液、緩沖液、培養(yǎng)基配置
        3.1.5 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面分子表達(dá)鑒定
        3.1.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HBMSC的表面抗原
        3.1.7 HBMSC的體外分化鑒定
        3.1.8 小分子化合物誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 HBMSC的表型和體外分化鑒定
        3.2.2 小分子化合物誘導(dǎo)HBMSC直接轉(zhuǎn)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
四、小分子化合物體內(nèi)誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元標(biāo)志物
    4.1 對(duì)象和方法
        4.1.1 主要儀器和耗材
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要細(xì)胞和動(dòng)物
        4.1.4 主要溶液、緩沖液、培養(yǎng)基配置
        4.1.5 小分子在體誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化實(shí)驗(yàn)
        4.1.6 組織切片和免疫熒光檢測(cè)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 小分子化合物在體內(nèi)誘導(dǎo)小鼠皮下組織細(xì)胞表達(dá)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的標(biāo)志物
        4.2.2 小分子化合物體內(nèi)誘導(dǎo)坐骨神經(jīng)周圍細(xì)胞表達(dá)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的標(biāo)志物
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3685417