目的:骨肉瘤來源于間葉組織,多發(fā)生在骨組織,是一種常見于青少年或兒童的惡性骨腫瘤,男性患者多于女性,它的病程進(jìn)展快、肺部轉(zhuǎn)移早、預(yù)后不良、易復(fù)發(fā),甚至死亡。目前骨肉瘤的治療包括通過手術(shù)措施盡量完整切除病灶以及圍手術(shù)期的抗腫瘤的綜合輔助治療。新輔助化療作為化療的首選,其不僅可以增加手術(shù)的安全性,而且能夠?yàn)榛颊吡可矶ㄖ坪线m的假體做好準(zhǔn)備。但目前化療的藥物品種有限,常伴隨明顯的全身毒副反應(yīng),給患者帶來痛苦,尋找更多有效、副作用小的藥物以及闡明其作用原理勢在必行。唑來膦酸是具有代表性的、副作用小的第三代二膦酸鹽,它具有骨代謝調(diào)節(jié)的特性,在體外能夠起到抑制破骨細(xì)胞活動的作用,進(jìn)而導(dǎo)致破骨細(xì)胞調(diào)亡,所以能夠抑制骨破壞活性增加誘發(fā)的骨質(zhì)吸收。另外有研究顯示,唑來膦酸還可以抑制或粘滯腫瘤細(xì)胞基質(zhì)釋放的多種刺激因子引起的破骨細(xì)胞活動增強(qiáng)和骨鈣釋放,從而減緩骨轉(zhuǎn)移的進(jìn)展和發(fā)生,并可一定程度上的導(dǎo)致骨肉瘤細(xì)胞的死亡。PI3K/AKT信號通路是參與多數(shù)細(xì)胞的分化調(diào)節(jié)、生長、繁殖的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。AKT別稱蛋白激酶B在活化后,繼續(xù)激活它的下游因子（GSK-3β等）,起到調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、凋亡的作用。糖原合成激酶3β是... 

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 試劑
    2.2 耗材
    2.3 儀器
    2.4 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.5.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.5.1.2 細(xì)胞傳代
            2.5.1.3 細(xì)胞凍存
                2.5.1.3.1 配制凍存液
                2.5.1.3.2 消化收取細(xì)胞
                2.5.1.3.3 進(jìn)行凍存
        2.5.2 采用MTT法檢測骨肉瘤MG-63 細(xì)胞活力變化
            2.5.2.1 MTT法
            2.5.2.2 MTT配制方法
            2.5.2.3 磷酸緩沖液(PBS)配制
            2.5.2.4 貼壁細(xì)胞MTT法
            2.5.2.5 MTT注意事項(xiàng)
        2.5.3 劃痕實(shí)驗(yàn)觀察骨肉瘤MG-63 細(xì)胞的遷移能力、凋亡改變
        2.5.4 透射電鏡觀察骨肉瘤MG-63 細(xì)胞在100μM唑來膦酸作用48h后細(xì)胞凋亡改變
            2.5.4.1 透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,TEM)的原理
            2.5.4.2 取材
            2.5.4.3 固定
            2.5.4.4 脫水
            2.5.4.5 浸透
            2.5.4.6 包埋和聚合
            2.5.4.7 超薄切片
            2.5.4.8 染色
        2.5.5 流式細(xì)胞儀檢測骨肉瘤MG-63、U-2OS細(xì)胞在100μM唑來膦酸作用48 h后,細(xì)胞的凋亡變化
            2.5.5.1 流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry,FCM)
            2.5.5.2 流式實(shí)施步驟
            2.5.5.3 流式注意事項(xiàng)
        2.5.6 蛋白印跡方法Western Blot(WB)檢測骨肉瘤MG-63、U-2 OS細(xì)胞在唑來膦酸作用后,對AKT/GSK-3β/β-Catenin信號通路的影響
            2.5.6.1 蛋白印跡方法原理
            2.5.6.2 WB實(shí)驗(yàn)分組
            2.5.6.3 收集細(xì)胞蛋白
            2.5.6.4 測定蛋白濃度
            2.5.6.5 電泳
            2.5.6.6 轉(zhuǎn)膜
            2.5.6.7 抗體雜交
        2.5.7 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 唑來膦酸(ZOL)抑制骨肉瘤MG-63 細(xì)胞增殖和細(xì)胞遷移
    3.2 唑來膦酸通過抑制AKT/GSK-3β通路作用骨肉瘤MG-63、U-2 OS細(xì)胞
    3.3 觀察在抑制GSK-3β后,唑來膦酸對骨肉瘤MG-63、U-2 OS細(xì)胞增殖和凋亡的影響
        3.3.1 GSK-3β可以介導(dǎo)唑來膦酸對骨肉瘤MG-63 細(xì)胞的增殖
        3.3.2 GSK-3β可以介導(dǎo)唑來膦酸對骨肉瘤MG-63、U-2 OS細(xì)胞的凋亡
    3.4 觀察在抑制GSK-3β后,唑來膦酸對Wnt/β-Catenin通路的影響
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的科研成果
致謝
個人簡介



本文編號：3652275