研究背景:血管性血友病因子（von Willebrand factor,VWF）主要是由血管內(nèi)皮細胞和巨核細胞產(chǎn)生的一種超大分子量的多聚體糖蛋白,細胞內(nèi)合成的VWF可以立即持續(xù)地分泌到細胞外,也可以超大型VWF分子（ultra-large VWF,UL-VWF）的形式儲存于血小板的α顆粒和內(nèi)皮細胞的Weibel-Palade小體中。當血管壁受損或受到某些炎癥因子刺激時,VWF被釋放到血液循環(huán)中,一方面通過其A3區(qū)與血管內(nèi)皮下Ⅰ型、Ⅲ型膠原的α-1鏈結(jié)合;另一方面通過A1區(qū)與血小板糖蛋白Ibα（glycoprotein Ibα,GPIbα）結(jié)合,成為聯(lián)系血小板和內(nèi)皮基質(zhì)的橋梁,在機體止血和血栓的形成過程中發(fā)揮著重要的作用。近年來,許多研究表明VWF除了在止血中起著關(guān)鍵作用,在機體炎癥的發(fā)生、組織的損傷和修復、血管新生、免疫調(diào)節(jié)以及癌癥轉(zhuǎn)移等眾多病理生理過程中也發(fā)揮著重要的作用。關(guān)于VWF在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用,有研究猜測其可能通過參與腫瘤細胞黏附至血小板和內(nèi)皮表面來促進腫瘤細胞的外滲和轉(zhuǎn)移。而血小板在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用已被廣泛研究,腫瘤細胞通過誘導血小板的聚集并形成雜聚體以保護其逃脫機體的免疫... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
    VWF分子的合成與分布
    VWF的結(jié)構(gòu)與功能
    VWF和腫瘤關(guān)系的研究進展
    VWF和骨肉瘤關(guān)系的研究進展
第一部分 VWF在骨肉瘤中的表達研究
    1 實驗材料與試劑
        1.1 一般臨床資料
        1.2 細胞系
        1.3 實驗試劑
        1.4 實驗儀器和設備
        1.5 常用緩沖液
    2 實驗方法與步驟
        2.1 標本收集與準備
        2.2 酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿VWF抗原
        2.3 HE染色
        2.4 免疫組織化學染色(IHC)
        2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡實驗(Western blot)
        2.6 免疫熒光實驗
        2.7 VWF多聚體電泳
    3 統(tǒng)計學分析
    4 實驗結(jié)果
        4.1 骨肉瘤患者血漿標本中VWF的表達水平檢測
        4.2 骨肉瘤患者病理組織標本中VWF的表達水平檢測
        4.3 人骨肉瘤細胞系SAOS2中VWF的表達檢測
        4.4 多聚體電泳檢測SAOS2中VWF的表達模式
    5 討論
第二部分 VWF在骨肉瘤細胞遷移和侵襲過程中的作用研究
    1 實驗材料與試劑
        1.1 細胞系
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器和設備
        1.4 常用緩沖液
    2 實驗方法與步驟
        2.1 PMA處理細胞
        2.2 免疫熒光實驗
        2.3 流式細胞術(shù)(Flow Cytometric Analysis,FCM)
        2.4 VWF多聚體電泳
        2.5 靜態(tài)條件下血小板黏附實驗
        2.6 剪切流動條件下血小板黏附實驗
        2.7 Cell Counting Kit-8(CCK8)實驗
        2.8 細胞遷移、侵襲實驗-Transwell
        2.9 ELISA檢測PDGF-BB和TGF-β1的含量
    3 統(tǒng)計學分析
    4 實驗結(jié)果
        4.1 PMA刺激SAOS2細胞中的VWF表達增多
        4.2 VWF多聚體電泳檢測PMA刺激后SAOS2細胞中VWF的表達增多
        4.3 靜態(tài)條件下VWF高表達的SAOS2細胞對血小板的黏附增多
        4.4 剪切流動條件下VWF高表達的SAOS2細胞黏附血小板增多
        4.5 血小板的黏附促進SAOS2細胞的增殖
        4.6 血小板的黏附促進SAOS2細胞的遷移
        4.7 血小板的黏附促進SAOS2細胞的侵襲
        4.8 血小板釋放PDGF-BB和TGF-β1促進SAOS2細胞的增殖、遷移和侵襲
    5 討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的論文及基金參與情況
中英文縮寫詞表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Super enhancer inhibitors suppress MYC driven transcriptional amplification and tumor progression in osteosarcoma[J]. Demeng Chen,Zhiqiang Zhao,Zixin Huang,Du-Chu Chen,Xin-Xing Zhu,Yi-Ze Wang,Ya-Wei Yan,Shaojun Tang,Subha Madhavan,Weiyi Ni,Zhan-peng Huang,Wen Li,Weidong Ji,Huangxuan Shen,Shuibin Lin,Yi-Zhou Jiang.  Bone Research. 2018(02)
[2]Plasma von Willebrand factor level as a prognostic indicator of patients with metastatic colorectal carcinoma[J]. Tzu-Chen Lin,Tzeon-Jye Chiou,Jin-Hwang Liu,Chueh-Chuan Yen,Po-Min Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2005(14)



本文編號：3648876