發(fā)布時(shí)間：2022-04-26 22:49

　　研究背景:血管性血友病因子（von Willebrand factor,VWF）主要是由血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞產(chǎn)生的一種超大分子量的多聚體糖蛋白,細(xì)胞內(nèi)合成的VWF可以立即持續(xù)地分泌到細(xì)胞外,也可以超大型VWF分子（ultra-large VWF,UL-VWF）的形式儲(chǔ)存于血小板的α顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞的Weibel-Palade小體中。當(dāng)血管壁受損或受到某些炎癥因子刺激時(shí),VWF被釋放到血液循環(huán)中,一方面通過(guò)其A3區(qū)與血管內(nèi)皮下Ⅰ型、Ⅲ型膠原的α-1鏈結(jié)合;另一方面通過(guò)A1區(qū)與血小板糖蛋白Ibα（glycoprotein Ibα,GPIbα）結(jié)合,成為聯(lián)系血小板和內(nèi)皮基質(zhì)的橋梁,在機(jī)體止血和血栓的形成過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。近年來(lái),許多研究表明VWF除了在止血中起著關(guān)鍵作用,在機(jī)體炎癥的發(fā)生、組織的損傷和修復(fù)、血管新生、免疫調(diào)節(jié)以及癌癥轉(zhuǎn)移等眾多病理生理過(guò)程中也發(fā)揮著重要的作用。關(guān)于VWF在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用,有研究猜測(cè)其可能通過(guò)參與腫瘤細(xì)胞黏附至血小板和內(nèi)皮表面來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的外滲和轉(zhuǎn)移。而血小板在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用已被廣泛研究,腫瘤細(xì)胞通過(guò)誘導(dǎo)血小板的聚集并形成雜聚體以保護(hù)其逃脫機(jī)體的免疫... 

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
    VWF分子的合成與分布
    VWF的結(jié)構(gòu)與功能
    VWF和腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展
    VWF和骨肉瘤關(guān)系的研究進(jìn)展
第一部分 VWF在骨肉瘤中的表達(dá)研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        1.1 一般臨床資料
        1.2 細(xì)胞系
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.5 常用緩沖液
    2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.1 標(biāo)本收集與準(zhǔn)備
        2.2 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿VWF抗原
        2.3 HE染色
        2.4 免疫組織化學(xué)染色(IHC)
        2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)
        2.6 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.7 VWF多聚體電泳
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 骨肉瘤患者血漿標(biāo)本中VWF的表達(dá)水平檢測(cè)
        4.2 骨肉瘤患者病理組織標(biāo)本中VWF的表達(dá)水平檢測(cè)
        4.3 人骨肉瘤細(xì)胞系SAOS2中VWF的表達(dá)檢測(cè)
        4.4 多聚體電泳檢測(cè)SAOS2中VWF的表達(dá)模式
    5 討論
第二部分 VWF在骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲過(guò)程中的作用研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.4 常用緩沖液
    2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.1 PMA處理細(xì)胞
        2.2 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.3 流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometric Analysis,FCM)
        2.4 VWF多聚體電泳
        2.5 靜態(tài)條件下血小板黏附實(shí)驗(yàn)
        2.6 剪切流動(dòng)條件下血小板黏附實(shí)驗(yàn)
        2.7 Cell Counting Kit-8(CCK8)實(shí)驗(yàn)
        2.8 細(xì)胞遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)-Transwell
        2.9 ELISA檢測(cè)PDGF-BB和TGF-β1的含量
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 PMA刺激SAOS2細(xì)胞中的VWF表達(dá)增多
        4.2 VWF多聚體電泳檢測(cè)PMA刺激后SAOS2細(xì)胞中VWF的表達(dá)增多
        4.3 靜態(tài)條件下VWF高表達(dá)的SAOS2細(xì)胞對(duì)血小板的黏附增多
        4.4 剪切流動(dòng)條件下VWF高表達(dá)的SAOS2細(xì)胞黏附血小板增多
        4.5 血小板的黏附促進(jìn)SAOS2細(xì)胞的增殖
        4.6 血小板的黏附促進(jìn)SAOS2細(xì)胞的遷移
        4.7 血小板的黏附促進(jìn)SAOS2細(xì)胞的侵襲
        4.8 血小板釋放PDGF-BB和TGF-β1促進(jìn)SAOS2細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲
    5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文及基金參與情況
中英文縮寫詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Super enhancer inhibitors suppress MYC driven transcriptional amplification and tumor progression in osteosarcoma[J]. Demeng Chen,Zhiqiang Zhao,Zixin Huang,Du-Chu Chen,Xin-Xing Zhu,Yi-Ze Wang,Ya-Wei Yan,Shaojun Tang,Subha Madhavan,Weiyi Ni,Zhan-peng Huang,Wen Li,Weidong Ji,Huangxuan Shen,Shuibin Lin,Yi-Zhou Jiang.  Bone Research. 2018(02)
[2]Plasma von Willebrand factor level as a prognostic indicator of patients with metastatic colorectal carcinoma[J]. Tzu-Chen Lin,Tzeon-Jye Chiou,Jin-Hwang Liu,Chueh-Chuan Yen,Po-Min Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2005(14)



本文編號(hào)：3648876