目的:心肌缺血/再灌注損傷是一種常見(jiàn)的復(fù)雜生理病理過(guò)程,而Ca2+調(diào)控紊亂是導(dǎo)致缺血再灌注后心肌功能障礙和細(xì)胞損傷的重要原因之一。右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）作為一種臨床常用的鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛藥,其器官保護(hù)作用近年來(lái)被越來(lái)越多的研究者報(bào)道。在心肌缺血再灌注損傷中,已經(jīng)證明Dex可以通過(guò)抑制ROS及激活抗炎通路等途徑發(fā)揮保護(hù)保用,而它是否可以通過(guò)調(diào)節(jié)鈣平衡來(lái)減輕缺血再灌注心肌的損傷,目前尚不清楚。本研究旨在探究Dex預(yù)處理對(duì)H9C2細(xì)胞氧糖剝奪/復(fù)氧（Oxygen Glucose Deprivation/Reperfusion,OGD/R）損傷模型中鈣離子的影響及其相關(guān)分子機(jī)制。方法:1、選用H9C2細(xì)胞,采用缺氧小室對(duì)細(xì)胞進(jìn)行OGD 24 h的處理,隨后復(fù)氧3h,建立OGD/R模型;Dex預(yù)處理組細(xì)胞在OGD前經(jīng)不同濃度Dex（0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L）預(yù)處理1 h,其余處理同OGD/R組;對(duì)照組細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。2、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),應(yīng)用甲基噻唑藍(lán)[3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
    2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 儀器及耗材
        2.2.3 培養(yǎng)方法
    2.3 氧糖剝奪/復(fù)氧(OGD/R)模型的建立
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3.3 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3.4 造模方法
    2.4 光學(xué)顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.5 甲基噻唑藍(lán)比色法（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium bromide，MTT）檢測(cè)細(xì)胞活力
        2.5.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.5.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.5.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.6 2,4-二硝基苯肼顯色法檢測(cè)培養(yǎng)液乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase， LDH）釋放率
        2.6.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.6.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.6.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.7 鈣成像記錄
        2.7.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.7.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.7.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.7.4 實(shí)驗(yàn)試劑(鈣成像第二部分)
        2.7.5 實(shí)驗(yàn)儀器(鈣成像第二部分)
        2.7.6 實(shí)驗(yàn)方法
    2.8 Q-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)水平
        2.8.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.8.2 PCR引物
        2.8.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.8.4 實(shí)驗(yàn)方法
    2.9 Western Blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)水平
        2.9.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.9.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.9.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.10 基因沉默
        2.10.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.10.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.10.3 實(shí)驗(yàn)方法(以6孔板為例)
    2.11 統(tǒng)計(jì)方法
第三章 結(jié)果
    3.1 Dex預(yù)處理能減輕H9C2心肌細(xì)胞OGD/R損傷并參與細(xì)胞內(nèi)的鈣調(diào)控
        3.1.1 細(xì)胞活力(MTT法檢測(cè))隨著缺氧/復(fù)氧時(shí)間的變化情況
        3.1.2 光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化
        3.1.3 Dex預(yù)處理能顯著提高心肌細(xì)胞活力,減少LDH釋放率
        3.1.4 Dex預(yù)處理能明顯抑制細(xì)胞內(nèi)鈣超載
    3.2 Dex參與對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)FKBP12.6及RyR2的表達(dá)調(diào)控
        3.2.1 Dex預(yù)處理能上調(diào)FKBP12.6在mRNA及蛋白水平的表達(dá)
        3.2.2 Dex預(yù)處理能抑制p-S2814RyR2及凋亡因子Cleaved-Caspase-3的蛋白表達(dá)
    3.3 基因沉默F(xiàn)KBP12.6能反轉(zhuǎn)Dex對(duì)OGD/R心肌細(xì)胞的保護(hù)作用
        3.3.1 Real-timePCR法檢測(cè)FKBP12.6基因沉默效率,確定轉(zhuǎn)染時(shí)間
        3.3.2 基因沉默F(xiàn)KBP12.6,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力及2,4-二硝基苯肼顯色法檢測(cè)培養(yǎng)液LDH釋放率的結(jié)果
        3.3.3 基因沉默F(xiàn)KBP12.6,鈣成像法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子
        3.3.4 基因沉默F(xiàn)KBP12.6,Western blotting檢測(cè)RyR2、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3的蛋白表達(dá)及RyR2磷酸化的改變
第四章 討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
Review
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文與會(huì)議摘要
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]右美托咪啶預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及鈣循環(huán)調(diào)控蛋白的影響[J]. 李霞,彭碧文,董航.  海南醫(yī)學(xué). 2015(18)
[2]心腦缺血再灌注損傷的機(jī)制及防治策略研究進(jìn)展[J]. 夏強(qiáng),錢令波.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(06)
[3]心肌缺血/再灌注損傷機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 劉勝中,楊雙強(qiáng).  實(shí)用醫(yī)院臨床雜志. 2007(01)
[4]腸缺血/再灌注損傷后白介素1-β水平與磷脂酶A2激活的關(guān)系[J]. 顏光濤,郝秀華,薛輝,王錄煥,李英麗,石麗萍.  生理學(xué)報(bào). 2002(01)
[5]鋅對(duì)缺血再灌注肝臟自由基含量和細(xì)胞凋亡的影響[J]. 蔣與剛,郭長(zhǎng)江,韋京豫,楊繼軍,蘇俊鋒,王先遠(yuǎn),高蘭興.  中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2001(03)
[6]心肌缺血再灌注損傷亞細(xì)胞Ca2+反常與ATP酶泵功能抑制[J]. 谷天祥,張顯清,谷春久,石玉秀,李厚文,姜桂娥,趙鳳凱,王天驕.  中華心血管病雜志. 2001(07)
[7]補(bǔ)體耗竭對(duì)心肌缺血再灌注的保護(hù)作用及機(jī)制[J]. 張磊,馬虹,黃守堅(jiān),孫家鈞.  中華心血管病雜志. 2001(06)

碩士論文
[1]右美托咪定預(yù)處理對(duì)缺血再灌注損傷大鼠心肌線粒體功能的影響[D]. 陸沁源.江蘇大學(xué) 2016
[2]FKBP12.6蛋白缺失對(duì)膿毒癥小鼠心肌損害作用的機(jī)理研究[D]. 孔令杰.山西醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3644727