SAS1B（sperm acrosomal SLLP1 binding protein,SAS1B）是新發(fā)現(xiàn)的基因,其表達產(chǎn)物最先在成熟卵細胞表面發(fā)現(xiàn),后來在女性有關(guān)的癌癥,如子宮癌、卵巢癌中發(fā)現(xiàn)有表達。癌癥化學療法是臨床上最常見的治療方法,但它非特異性殺滅癌細胞的同時,正常細胞也受累。如果化療藥物僅識別癌細胞,對其特異性殺滅,無疑會給癌癥患者帶來福音,但尋找癌細胞表面特異性抗原的研究一直沒有重大突破。SAS1B蛋白若僅表達于癌細胞表面,這勢必會為癌癥治療提供強有力的靶標,但目前SAS1B基因的功能不清楚。本研究利用CRISPR/Cas9基因修飾、基因克隆、流式細胞術(shù)、實時熒光定量PCR、Western Blot、免疫組化染色、蛋白純化、抗體制備、ELISA等技術(shù)對人腫瘤組織、胃癌細胞系、小鼠胚胎及成體組織的SAS1B基因開展多角度、全方位、深層次研究,旨在揭示SAS1B基因的生物學意義,為抗癌藥物的研制、腫瘤早期診斷以及生殖醫(yī)學提供翔實依據(jù)。（1）采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建pET-22b-SAS1B原核表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化BL21（DE3）細胞,并通過AKTA pure 25蛋白純化儀和Mill... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１人卵巢成熟卵細胞ＳＡＳ１Ｂ表達??Ｆｉｇ．?１?ＳＡＳ１Ｂ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｈｕｍａｎ?ｏｖａｒｉａｎ?ｍａｔｕｒｅ?ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ?ｃｅｌｌｓ??

?新癌－卵基因ＳＡＳ１Ｂ在人胃癌和甲狀腺癌中表達及生物學意義研究?３??細胞，然后利用細胞膜的胞吞作用將荷載藥物遞送到細胞內(nèi)部，ＳＡＳ１Ｂ抗體復合物在??癌細胞內(nèi)開始內(nèi)化過程。而在這個過程中，細胞表面沒有ＳＡＳ１Ｂ抗原的細胞則不會被??ＳＡＳ１Ｂ抗體藥物“盯上”，載荷有毒藥物ＳＡＳ１Ｂ抗體復合物的釋放會觸發(fā)癌細胞的內(nèi)??部生物化學變化甚至導致死亡。癌細胞表面的ＳＡＳ１Ｂ蛋白作為靶向藥物的“接收器”??可能會降低傳統(tǒng)癌癥治療的副作用。特別是對于女性卵巢癌癥患者來說更是福音，??ＳＡＳ１Ｂ抗體藥物只會攻擊癌細胞和生長中的卵細胞，對保留女性生育能力具有重要意??義。??也?｛??Ｎ愈??圖１人卵巢成熟卵細胞ＳＡＳ１Ｂ表達??Ｆｉｇ．?１?ＳＡＳ１Ｂ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｈｕｍａｎ?ｏｖａｒｉａｎ?ｍａｔｕｒｅ?ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ?ｃｅｌｌｓ??■■■國??圖２鼠卵細胞膜上ＳＡＳ１Ｂ蛋白（紅色）表達??Ｆｉｇ．２?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＳＡＳ１Ｂ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｎ?ｍｏｕｓｅ?ｏｏｃｙｔｅ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?（ｒｅｄ）??我國還沒有開展ＳＡＳ１Ｂ新抗原在癌癥方面的治療，當然ＳＡＳ１Ｂ基因的性質(zhì)和??功能在國際上研究得還不清楚。ＳＡＳ１Ｂ基因，從其名可知與精子的頂體反應有關(guān)，??也就是與受精作用密切相關(guān)。ＳＡＳ１Ｂ蛋白在成熟卵細胞中表達，在體細胞中是處??于關(guān)閉狀態(tài)的，為什么在癌癥中會出現(xiàn)ＳＡＳ１Ｂ蛋白表達呢，機制不清楚，ＳＡＳ１Ｂ??

?新癌－卵基因ＳＡＳ１Ｂ在人胃癌和甲狀腺癌中表達及生物學意義研究?５??意義重大，而且顯示出巨大商機，同時也為以后開發(fā)睪－新癌抗原的研宄提供更寬廣??的視野。??目前局限的研宄結(jié)果顯示，ＳＡＳ１Ｂ大多位于細胞的表面，它的出現(xiàn)說明細胞進??入高度増殖狀態(tài)，在正常成體細胞是關(guān)閉的，為什么在腫瘤細胞中發(fā)現(xiàn)重新開啟表??達呢？重新啟動后導致正常體細胞變成癌細胞的調(diào)節(jié)模式是什么呢，這些還是未知??數(shù)。２０１８年有關(guān)胰腺癌的文獻報道顯示ＳＡＳ１Ｂ的表達可在胞漿，多數(shù)在細胞膜上??表達（見圖４）?［６１］，而在２０１５年文獻報道子宮來源的癌細胞中發(fā)現(xiàn)ＳＡＳ１Ｂ在細胞??質(zhì)中表達（見圖５嚴］，ＳＡＳ１Ｂ在不同細胞中表達的部位不一樣，顯示ＳＡＳ１Ｂ功能??非常復雜，目前我們對ＳＡＳ１Ｂ功能的揭示只是冰山一角，所以對其研究迫在眉睫。??Ｌｉｖｅ／Ｎｏｎ－ｐｅｒｍｅａｙｉａｃ??＿??，１—＿??ｊＩＨＬ??圖４胰腺癌細胞系ＳＡＳ１Ｂ中表達（綠色）??Ｆｉｇ．４?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ?ｃａｎｃｅｒ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅ?ＳＡＳ１Ｂ?（ｇｒｅｅｎ）??根據(jù)文獻和我們前期研究結(jié)果建立如下假說：ＳＡＳ１Ｂ是細胞具有多項分化潛能??的標志性蛋白質(zhì)，它的開啟使細胞具有全能性，而ＳＡＳ１Ｂ蛋白的關(guān)閉預示細胞開始??向終末分化。癌細胞ＳＡＳ１Ｂ蛋白的重啟應當模式使它具有“返祖現(xiàn)象”，具有分化??的潛能。內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病受內(nèi)環(huán)境的影響，像子宮癌、卵巢癌等受雌激素、孕激素??等影響，所以表觀遺傳修飾可能在ＳＡＳ１Ｂ基因重啟應答模式中發(fā)揮重要作用。甲狀??腺癌屬于內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤，高惡性的未分化甲狀腺癌病人在臨床上往往發(fā)現(xiàn)疾病時

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]胃癌靶向治療的現(xiàn)狀與思考[J]. 李丹妮,劉靜,劉云鵬.  實用腫瘤雜志. 2019(02)
[4]兔抗人copine-8蛋白多克隆抗體的制備[J]. 張昭穎,李游,游金,彭杰夫,盧潔,盧春花.  細胞與分子免疫學雜志. 2018(05)
[5]中國甲狀腺癌的流行現(xiàn)狀和影響因素[J]. 董芬,張彪,單廣良.  中國癌癥雜志. 2016(01)
[6]晚期胃癌分子靶向治療研究現(xiàn)狀[J]. 趙鵬飛,曹邦偉.  臨床與病理雜志. 2015(08)

碩士論文
[1]BARD1基因敲除與過表達對人真核細胞中Aurora-A、BRCA1與p53表達影響[D]. 于建.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學 2019
[2]RNase R在大腸桿菌的表達和條件優(yōu)化[D]. 李軻.華南理工大學 2019
[3]口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗體的制備與鑒定[D]. 陳飛.山東農(nóng)業(yè)大學 2018



本文編號：3627985