目的:探究載鋅多壁碳納米管/殼聚糖復(fù)合材料上的鋅離子是否有促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化的作用,以及該材料上鋅離子的適宜濃度。方法:制備載有不同含量鋅離子的多壁碳納米管/殼聚糖復(fù)合材料,并用掃描電鏡觀察。其中,0.2%（質(zhì)量百分?jǐn)?shù)）鋅含量的復(fù)合材料為低鋅組,1%（質(zhì)量百分?jǐn)?shù)）鋅含量的復(fù)合材料為中鋅組,2.5%（質(zhì)量百分?jǐn)?shù)）鋅含量的復(fù)合材料為高鋅組,不含鋅的復(fù)合材料為對(duì)照組。將MC3T3-E1細(xì)胞接種于4種材料表面進(jìn)行培養(yǎng),分別用MTT法、堿性磷酸酶試劑盒、ELISA法、激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)MC3T3-E1細(xì)胞在復(fù)合材料上的增殖量、堿性磷酸酶活性、骨鈣素水平、細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果:掃描電鏡觀察到該材料具有大量孔隙結(jié)構(gòu);mtt檢測(cè)中24h、48h、72h時(shí),中鋅組細(xì)胞增值量高于對(duì)照組（P<0.05）,低鋅組細(xì)胞增值量與對(duì)照組無(wú)明顯差距,高鋅組細(xì)胞增值量小于對(duì)照組（P<0.05）;堿性磷酸酶活性檢測(cè)中24h、48h、72h時(shí),中鋅組高于對(duì)照組（P<0.05）,低鋅組與對(duì)照組無(wú)明顯差距,高鋅組小于對(duì)照組（P<0.05）;骨鈣素水平檢測(cè)中48h時(shí),中鋅組骨鈣素濃度高于對(duì)照組（P<... 

【文章來(lái)源】：口腔醫(yī)學(xué)研究. 2017,33(07)北大核心

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圖１復(fù)合材料表面形貌Ｆｉｇ．１Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓｕｒｆａｃｅｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ

鋅組骨鈣素濃度（３．５５２±０．２１９）小于對(duì)照組（５．７３２±０．６０９）（Ｐ＜０．００１＜０．０５）。２．５細(xì)胞粘附形態(tài)低鋅組細(xì)胞呈梭形，大部分細(xì)胞伸出２個(gè)偽足，細(xì)胞間的偽足相互交叉、連接；中鋅組細(xì)胞呈多邊形，每個(gè)細(xì)胞伸出３～４個(gè)偽足，細(xì)胞間的偽足也相互交叉、連接，細(xì)胞伸展情況明顯好于低鋅組；高鋅組部分細(xì)胞形態(tài)、伸展情況與低鋅組類似，但是可以觀察到部分細(xì)胞皺縮；對(duì)照組細(xì)胞的形態(tài)和伸展情況與低鋅組無(wú)明顯差異，見圖２。圖２細(xì)胞粘附形態(tài)Ｆｉｇ．２Ａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅｃｅｌｌｓ３討論多壁碳納米管／殼聚糖復(fù)合材料有良好的力學(xué)性能，并且具有生物可降解性和生物相容性。加載鋅離子為該材料在修復(fù)骨缺損的應(yīng)用上提供了新思路，是該研究的重要?jiǎng)?chuàng)新之處。鋅是維持機(jī)體正常生理功能和機(jī)體內(nèi)環(huán)境正常生化代謝所必需的微量元素，其還具有抗菌性［９］。鋅在近３００種酶中起著重要作用，能夠催化或者共催化多種蛋白質(zhì)的正確折疊［１０］。鋅的缺乏對(duì)細(xì)胞增殖起到負(fù)面作用，這一作用是通過(guò)在細(xì)胞分裂周期中抑制ＤＮＡ合成來(lái)實(shí)現(xiàn)的［１１］。鋅離子可以激活堿性磷酸酶的活性［１２］，有學(xué)者研究哺乳動(dòng)物細(xì)胞的堿性磷酸酶與鋅的關(guān)系時(shí)也發(fā)現(xiàn)，在一定范圍內(nèi)，堿性磷酸酶的活性隨鋅濃度的升高而增強(qiáng)［１３］。首先，堿性磷酸酶是成骨分化的重要標(biāo)志物。其次，它在骨的鈣化中也起到極為關(guān)鍵的作用，一方面，鈣化的啟動(dòng)有賴于堿性磷酸酶，另一方面，堿性磷酸酶可以促進(jìn)局部ＰＯ４３－濃度的提高，加速鈣化。而在鋅缺乏時(shí)，堿性磷酸酶三級(jí)結(jié)

ｎ羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽試劑說(shuō)明書，用鬼筆環(huán)肽和ＤＡＰＩ對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。在共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察，選擇ＴＲＩＴＣ激發(fā)／發(fā)射濾片（Ｅｘ∶Ｅｍ＝５４５ｎｍ∶５７０ｎｍ）和ＤＡＰＩ激發(fā)／發(fā)射濾片（Ｅｘ∶Ｅｍ＝３６４ｎｍ∶４５４ｎｍ）。１．２．７統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有定量數(shù)據(jù)以珚ｘ±的形式表示，采用統(tǒng)計(jì)分析軟件ＳＰＳＳ１８．０進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較用ＳＮＫ－ｑ檢驗(yàn)。２結(jié)果２．１載鋅多壁碳納米管／殼聚糖復(fù)合材料的表面形貌掃描電鏡圖（圖１）顯示，該材料具有大量孔隙結(jié)構(gòu)。有利于細(xì)胞的黏附，以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的滲入和代謝產(chǎn)物的排出。圖１復(fù)合材料表面形貌Ｆｉｇ．１Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓｕｒｆａｃｅｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ２．２細(xì)胞增殖情況ＭＴＴ檢測(cè)結(jié)果（表１）顯示，在２４ｈ時(shí)，中鋅組細(xì)胞增值率高于對(duì)照組（Ｐ＜０．７２６ＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｕｌ．２０１７，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．７

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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