目的:探明人黃韌帶骨化（ossification of ligament flavum,OLF）的SUMO（small ubiquitin-like modifier）化修飾情況;通過誘導(dǎo)BMSCs（bone marrow stromal cells）成骨分化,建立OLF成纖維細(xì)胞骨化模型,弄清楚BMSCs被誘導(dǎo)成骨分化后SUMO表達(dá)情況及細(xì)胞分化情況,研究SUMO1對BMSCs成骨分化的影響;通過施加缺氧應(yīng)激,獲知SUMO1表達(dá)改變時,被誘導(dǎo)成骨分化后的BMSCs缺氧應(yīng)激能力改變情況。方法:通過臨床手術(shù)獲取OLF患者及黃韌帶正常的脊柱疾患患者黃韌帶組織,采用Ⅰ型膠原酶消化法和組織塊培養(yǎng)法二者結(jié)合方法分離培養(yǎng)出其中成纖維細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài);使用Western Blot方法檢測OLF成纖維細(xì)胞的SUMO表達(dá)及SUMO化修飾情況;通過分離和培養(yǎng)小鼠股骨骨髓內(nèi)BMSCs,使用骨化誘導(dǎo)試劑盒誘導(dǎo)其骨化,建立OLF細(xì)胞模型,檢測骨化標(biāo)記物ALP（alkaline phosphatase）、COL-I（collagen1）、OCN（osteocalcin）、Runx2（runt-related t... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

其中一例OLF患者的X-ray、CT、MRI表現(xiàn)，可見在T11/12水平椎

圖 1.2 圖 1.1 中 OLF 患者 T11/12 水平椎管內(nèi)骨化黃韌帶行病理學(xué)檢查，提示為骨組織伴鈣化，表面可見透明變性纖維組織，符合黃韌帶骨化1.2.2 OLF 黃韌帶內(nèi)成纖維細(xì)胞特點OLF 患者來源組織完全骨化部位幾乎很難分離培養(yǎng)出成纖維細(xì)胞，而在骨化與正常交界部位黃韌帶組織內(nèi)可分離培養(yǎng)出數(shù)量較少的成纖維細(xì)胞，但其梭形形態(tài)不典型，細(xì)胞數(shù)目明顯低于正常組織來源細(xì)胞，且自第 4 代便出現(xiàn)去分化現(xiàn)象，實驗價值降低（圖 1.3）。

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 一、OLF成纖維細(xì)胞 SUMO 化修飾水平研究梭形形態(tài)，細(xì)胞數(shù)目眾多；B：OLF 患者骨化黃韌帶骨化周圍交界部位組織來源的成纖維細(xì)胞，細(xì)胞在梭形形態(tài)基礎(chǔ)上呈現(xiàn)一定不規(guī)則表現(xiàn)，成纖維細(xì)胞數(shù)目相對較少，骨化病灶內(nèi)幾乎無活性細(xì)胞存在，骨化病灶周圍出現(xiàn)軟骨樣細(xì)胞，且該類細(xì)胞無法遷徙出病灶組織1.2.3 OLF 來源成纖維細(xì)胞的結(jié)合 SUMO1 蛋白表達(dá)降低選取 Western Blot 方法檢測 SUMO1 蛋白的表達(dá)情況，進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)病理來源成纖維細(xì)胞中的結(jié)合 SUMO1 蛋白低于正常組織來源成纖維細(xì)胞。說明其SUMO1 化修飾水平下調(diào)（圖 1.4）。

【參考文獻(xiàn)】：
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