目的:去勢法構建大鼠骨質疏松模型;分離、培養(yǎng)、鑒定、誘導分化及使用USPIO標記大鼠BMSCs;BMSCs植入大鼠椎體后通過MRI進行示蹤,最后使用Micro-CT測定和觀察PTH與BMSCs在骨質疏松大鼠椎體內的成骨效果。方法:1.將50只大鼠隨機分為假手術組（SHAM,n=10）與骨質疏松造模組（OVX,n=40）。OVX組切除雙側卵巢,建立骨質疏松模型;SHAM組切除卵巢周圍脂肪組織,大小與卵巢類似。12w后用大鼠雌激素ELISA試劑盒分別檢測兩組大鼠的血清雌激素水平與腰6椎體相關骨性指標。2.選擇全貼壁法體外分離、培養(yǎng)、代增BMSCs,經流式細胞技術鑒定所提取細胞是否為BMSCs。鑒定后進行BMSCs的成骨誘導分化并行堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定。3.通過PLL轉染的USPIO標記BMSCs,普魯士藍染色法證明標記成功。轉染后行BMSCs增殖能力測定,MTT相關計算軟件繪制生長曲線;臺盼藍拒染法檢測細胞活性。4.將SHAM組記為A組,OVX組隨機分為B、C、D、E組,每組10只。A、B組不做任何處理,C組按60μg/kg劑量背部皮下注射Rat PTH 1-34,隔日1次,連續(xù)... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數】：51 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

骨質疏松大鼠模型的建立

BMSCs 接種于 25cm2細胞培養(yǎng)瓶后，細胞略呈淡黃色半透明狀類圓形，密集重疊懸浮于完全培養(yǎng)基中。24h 后觀察可見部分細胞貼壁，48h 半量換液后光鏡下可見培養(yǎng)瓶底部有少量梭形細胞，高倍鏡下核仁清晰可見；3d 后再次換液可見密集的細胞團，呈漩渦狀（如圖 2-1 所示）。傳代后細胞貼壁較原代快，形態(tài)均勻，生長迅速。原代 BMSCs 40× 原代 BMSCs 100×

圖 2-2 大鼠 BMSCs 的流式細胞技術鑒定MSCs 的成骨誘導鑒定SCs 成骨誘導分化約 10d 后，行堿性磷酸酶染色，可見深藍色至灰黑（如圖 2-3 所示）；誘導分化約 21d 后行茜素紅染色，光鏡下可見細胞圖 2-4 所示），反應陽性，證明成骨誘導成功。

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]不同分離方法及培養(yǎng)條件對兔骨髓間充質干細胞生長增殖及生物學特性的影響[J]. 馬力,劉大軍,李德天,劉沛田,邊小慧.  中國組織工程研究與臨床康復. 2008(38)
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本文編號：3525144