研究背景骨肉瘤是最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤,好發(fā)于青少年,有高度的侵襲和轉(zhuǎn)移特性,預(yù)后較差。自二十世紀(jì)七十年代起,由于新輔助化療的應(yīng)用,骨肉瘤的五年生存率逐漸提高到65%以上,但是自九十年代以來,骨肉瘤的治療效果進(jìn)入平臺(tái)期,生存率一直沒有明顯的提高。骨肉瘤轉(zhuǎn)移是引起患者最終死亡的主要原因,深入理解轉(zhuǎn)移的機(jī)制,對(duì)于改善治療效果有重要意義。失巢凋亡是由細(xì)胞脫離細(xì)胞外基質(zhì)引起的程序性細(xì)胞死亡。在生理情況下,失巢凋亡可以阻止脫落的細(xì)胞重新粘附到不正確的位置上,對(duì)機(jī)體起著重要的防御作用。腫瘤細(xì)胞初始以原發(fā)灶的形式存在,待其脫離細(xì)胞外基質(zhì)后,極少數(shù)獲得抗失巢凋亡能力,可以在懸浮條件下存活,進(jìn)而通過血液、淋巴等途徑轉(zhuǎn)移到其他器官增殖和分化。目前普遍認(rèn)為,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,抗失巢凋亡是轉(zhuǎn)移和侵襲的重要基礎(chǔ)。腫瘤細(xì)胞通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、激活抗凋亡的信號(hào)通路、調(diào)整細(xì)胞能量代謝等方式獲得抗失巢凋亡的能力,而microRNA參與其中,起著重要作用。MicroRNA是一類非編碼的小RNA分子,miRNA基因經(jīng)過RNA聚合酶II、DROSHA、DICER等酶的轉(zhuǎn)錄加工,最終形成成熟的miRNA。成熟的miRN... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．骨肉瘤Ｕ２０Ｓ和Ｓａｏｓ－２細(xì)胞在黏附和失黏附條件下的形態(tài)

組中ｍｉＲ－４５１表達(dá)水平低于貼壁培養(yǎng)組（０．４５３±０．２３４?ｖｓ．?０．７３４±０．３４５）。采用獨(dú)??立樣本ｔ檢驗(yàn)得出，在骨肉瘤Ｓａｏｓ－２和Ｕ２０Ｓ細(xì)胞中，ｍｉＲ－４５１在失巢凋亡模型??組中的表達(dá)水平較貼壁培養(yǎng)組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ＜〇．〇５）（圖２）。??■貼壁培養(yǎng)組??ｊ?，?？？夫繼凋亡組??Ｉ?Ｉ?Ｉ??＾?Ｓａｏｓ－２?Ｕ２０Ｓ??圖２．貼壁培養(yǎng)組和失巢凋亡模型組ｍｉＲ－４５１的表達(dá)差異。Ｓａｏｓ－２失巢凋亡??模型組中ｍｉＲ－４５１表達(dá)量低于貼壁培養(yǎng)組；Ｕ２０Ｓ失巢凋亡模型組中ｍｉＲ－４５１表??達(dá)量低于貼壁培養(yǎng)組。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＊ｐ＜０．０５）。??Ｆｉｇ?２．?Ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｏｆ?ｍｉＲ－４５１?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ａｄｈｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ａｎｏｉｋｉｓ??ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｍｉＲ－４５１?ｉｎ?Ｓａｏｓ－２?ａｎｏｉｋｉｓ?ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗａｓ??ｌｏｗｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｉｎ?ａｄｈｅｒｅｎｔ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｇｒｏｕｐ，?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｍｉＲ－４５１?ｉｎ??Ｕ２０Ｓ?ａｎｏｉｋｉｓ?ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗａｓ?ｌｏｗｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｉｎ?ａｄｈｅｒｅｎｔ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｗａｓ??ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ?（＊?ｐ?＜?０．０５）．??２７??

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組。轉(zhuǎn)染后，首先提取四個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的總ＲＮＡ，通過電泳對(duì)其完整??性進(jìn)行檢測，可見２８ｓ、１８ｓ、５ｓ三條帶顯示清晰，表明總ＲＮＡ未出現(xiàn)明顯降解??（圖３）。進(jìn)一步用熒光定量ＰＣＲ儀擴(kuò)增反應(yīng)體系，結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組、??轉(zhuǎn)染試劑組、ｍｉＲ－４５１?ＮＣ組相比，ｍｉＲ－４５１在ｍｉＲ－４５１質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Ｕ２０Ｓ細(xì)胞??的表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ＜〇．〇５）；而在空白對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑組??和ｍｉＲ－４５１?ＮＣ組Ｕ２０Ｓ細(xì)胞之間，ｍｉＲ－４５１的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義??（ｐ＞０．０５）（圖?４）。??圖３．?ＲＮＡ提取電泳圖（１：空白對(duì)照組；２：轉(zhuǎn)染試劑組；３：?ｍｉＲ－４５１?ＮＣ??組；４：?ｍｉＲ－４５１質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組）。可見２８ｓ、１８ｓ、５ｓ三條帶顯示清晰，總ＲＮＡ??未出現(xiàn)明顯降解。??Ｆｉｇ?３．?Ｔｈｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ＲＮＡ．?（１：?ｂｌａｎｋ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?２：?ｒｅａｇｅｎｔ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｇｒｏｕｐ；?３：?ｍｉＲ－４５１?ＮＣ?ｇｒｏｕｐ；?４：?ｍｉＲ－４５１?ｐｌａｓｍｉｄ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｇｒｏｕｐ）??Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｓｈｏｗｅｄ?ｔｈａｔ?２８ｓ，１８ｓ?ａｎｄ?５ｓ?ＲＮＡ?ｂａｎｄｓ?ｗｅｒｅ?ｃｌｅａｒｌｙ?ｖｉｓｉｂｌｅ，??ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ?ｔｈａｔ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｗａｓ?ｎｏｔ?ｄｅｇｒａｄｅｄ．??２８??

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3509402