研究目的:研究探討人體肌動蛋白家族成員Homo sapiens kinesin family member21B（KIF21B）基因在骨肉瘤的增殖及遷移這兩個進程當中起到的作用。方法:首先在培養(yǎng)的HOS,Saos-2,U-2 OS三個常用骨肉瘤細胞系中應(yīng)用實時定量PCR（qPCR）方法檢測KIF21B基因的表達豐度ACT以驗證其在骨肉瘤中的異常過度表達。隨后以KIF21B基因為模板,設(shè)計RNA干擾靶點序列,構(gòu)建目的基因RNA干擾慢病毒載體并包裝（shRNA慢病毒）。對體外培養(yǎng)的U-2 OS細胞進行shRNA慢病毒感染達到敲除實驗組KIF21B基因的目的,并檢測其中目標基因的敲除率（實驗中敲除率達到74.9%）,檢測合格的細胞分入實驗組shK][F21B組（正常目的細胞,加入shRNA病毒感染的細胞組）并引入另一組對照組shCtrl組（正常目的細胞,陰性對照病毒感染的細胞組）。將兩組細胞培養(yǎng)后分別進行Western blot試驗驗證靶點的有效性,然后進行Ciligo細胞計數(shù)、MTT細胞活力檢測、細胞周期分析及細胞凋亡檢測,比較兩組實驗結(jié)果以探究KIF21B基因在骨肉瘤細胞增殖中的作用。同... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－２：兩組感染細胞在培養(yǎng)７２小時后，用顯微鏡進行觀察

?第３章結(jié)果???表３－２及圖３－３：使用ｑＰＣＲ實驗中２＾＾１方法測算實驗組及對照組目的基因表達豐度。對照??組ｓｈＣｔｒｌ中樣本２＿ＡＡＣｔ均值為］．００２±０．０７４，大于實驗組的０．０２５１?土０．０７４，經(jīng)兩組配對ｔ檢驗（樣??本量為３），兩組間在統(tǒng)計學上存在明顯差異（＊＊Ｐ＝０．０００２＜０．０１）�？梢妰山MＡＣｔ值結(jié)果中??實驗組大于對照組。將２－ＡＡＣｔ平均值代入計算公式（ｓｈＣｔｒＩ－ｓｈＫＩＦ２１Ｂ）?／ｓｈＣｔｒｌ計算得到目的??基因敲減效率約為７４．９％。??Ｔａｂｌｅ?３－２?ａｎｄ?ｆｉｇｕｒｅ?３－３：?ｕｓｅ?ｔｈｅ?２＂ＡＡＣｔ?ｍｅｔｈｏｄ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｑＰＣＲ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｔｏ?ｍｅａｓｕｒｅ?ｔｈｅ?ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ??ｇｅｎｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｂｕｎｄａｎｃｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｈｅ?ｍｅａｎ?２＿ＡＡａｖａｌｕｅ?ｏｆ??ｓａｍｐｌｅ?ｉｎ?ｓｈＣｔｒｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗａｓ?１．００２土０．０７４，?ｇｒｅａｔｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ??ｇｒｏｕｐ，?ｗｈｉｃｈ?ｗａｓ?０．０２５１?±０．０７４．?Ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｔ－ｔｅｓｔ?ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ?（ｎ＝３），?ｔｈｅｒｅ?ｗａｓ?ａ??ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｈｅ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ?（＊＊Ｐ＝０．０００２＜０．０】）．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｗｏ


本文編號：3494359