發(fā)布時間：2021-10-31 23:31

　　目的:從細(xì)胞水平探討PKM2表達(dá)對骨肉瘤細(xì)胞增殖與侵襲的影響,挖掘PKM2在骨肉瘤早期診斷、治療靶點(diǎn)和預(yù)后評估的價值。方法:1.通過Lipofectamine2000將含有PKM2靶向序列的si RNA瞬時轉(zhuǎn)染骨肉瘤MG63細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,正常培養(yǎng)的MG63細(xì)胞和轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的MG63細(xì)胞為對照組。2.通過Western blot技術(shù)檢測PKM2的表達(dá)變化。3.CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測下調(diào)PKM2表達(dá)后對骨肉瘤細(xì)胞MG63增殖能力的影響。4.Transwell實(shí)驗(yàn)檢測下調(diào)PKM2后對骨肉瘤細(xì)胞MG63侵襲能力的影響。結(jié)果:1.轉(zhuǎn)染si RNA-PKM2的骨肉瘤MG63細(xì)胞中PKM2的表達(dá)降低,與正常培養(yǎng)的細(xì)胞對照組和轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2.CCK-8增殖試驗(yàn)中,在48h和72h,轉(zhuǎn)染si RNA-PKM2的MG63細(xì)胞的吸光度值顯著低于對照組（P<0.05）。3.平板克隆實(shí)驗(yàn)中,轉(zhuǎn)染si RNA-PKM2的MG63細(xì)胞的克隆計(jì)數(shù)為79.34±5.01個,顯著少于對照組（P<0.05）。4、Transwell實(shí)驗(yàn)中,轉(zhuǎn)染si... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

腫瘤的十大特征

estern blot 檢測 siRNA-PKM2 干擾后 MG63 中 PK siRNA-PKM2 瞬時轉(zhuǎn)染 MG63 細(xì)胞后，通過 Western blo化。結(jié)果顯示，si609 組 PKM2 蛋白表達(dá)量為 0.34±0.01，細(xì)胞對照組）和 NC 組（轉(zhuǎn)染 siRNA-scramble 無關(guān)序列對差異（P＜0.05），而 KB 組和 NC 組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（相比，siRNA-PKM2干擾后PKM2表達(dá)降低（表1，圖2）。說染 MG63 細(xì)胞，同時下調(diào)了 PKM2 的表達(dá)，且干擾效果表 1 si RNA 干擾后骨肉瘤細(xì)胞 MG63 中 PKM2 的表達(dá)改變相對值1 2 3B 組 1.00 1.00 1.00 C 組 0.98 0.98 1.00 09 組 0.33 0.33 0.35

CK-8 實(shí)驗(yàn)檢測下調(diào) PKM2 表達(dá)對 MG63 增殖的影響過 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測下調(diào) PKM2 表達(dá)對骨肉瘤細(xì)胞 MG63 增殖的影時間延長，si609 組的吸光度逐漸降低，而 KB 組（正常培養(yǎng)的細(xì) NC 組（轉(zhuǎn)染 siRNA-scramble 無關(guān)序列對照組）的吸光度均上升，si609 組與 KB 組、NC 組的吸光度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說明下調(diào) PKM2 表達(dá)后，骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力顯著下降。表 2 siRNA-PKM2 干擾后骨肉瘤細(xì)胞 MG63 的增殖結(jié)果吸光度比較KB 組 NC 組 si609 組 P4h 1.11±0.01 1.10±0.02 1.08±0.05 0.548h 1.26±0.01 1.17±0.11 0.92±0.01*# 0.002h 1.55±0.06 1.35±0.08* 0.82±0.02*# <0.0

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Tumor pyruvate kinase M2:A promising molecular target of gastrointestinal cancer[J]. Chen Guo,Guan Li,Jianing Hou,Xingming Deng,Sheng Ao,Zhuofei Li,Guoqing Lyu.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(06)
[2]脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染犬腎上皮細(xì)胞的方法改進(jìn)與優(yōu)化[J]. 柴百惠,繩秀珍,唐小千,邢婧,戰(zhàn)文斌.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(S2)
[3]骨肉瘤臨床循證診療指南[J]. 郭衛(wèi),牛曉輝,肖建如,蔡鄭東.  中華骨與關(guān)節(jié)外科雜志. 2018(04)
[4]骨肉瘤化療耐藥分子機(jī)制的相關(guān)研究進(jìn)展[J]. 王雅靈,閔大六.  癌癥進(jìn)展. 2016(04)

碩士論文
[1]PKM2在人骨肉瘤組織中的表達(dá)及臨床意義[D]. 劉政選.南華大學(xué) 2017



本文編號：3469073