目的:1.明確大鼠坐骨神經(jīng)離斷性損傷后瞬時受體電位陽離子通道亞家族成員V1（TRPV1）表達(dá)水平及功能狀態(tài)的變化;2.探討損傷后TRPV1功能阻斷對大鼠坐骨神經(jīng)離斷損傷后神經(jīng)再生的干預(yù)作用;3.研究損傷后TRPV1功能阻斷對大鼠坐骨神經(jīng)離斷損傷后損傷局部再生相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響;4.為周圍神經(jīng)損傷的修復(fù)提供新的治療靶點(diǎn)。方法:1.實(shí)驗分為7組:正常對照組,單純損傷組,損傷+AMG-517 150μg/kg組及損傷+AMG-517 300μg/kg組,除對照組外,其余各組再根據(jù)損傷后取材時間不同分為術(shù)后1周和2周組。神經(jīng)損傷采用大鼠左后肢坐骨神經(jīng)離斷術(shù);藥物干預(yù)采用坐骨神經(jīng)離斷術(shù)后30min左右用微量注射器于損傷同側(cè)L₃、L₄及L₅背根神經(jīng)節(jié)（DRG）周圍注射不同劑量TRPV1阻斷劑AMG-517（150μg/kg,300μg/kg）。2.于術(shù)后1周和2周取材,分別采用ELISA、環(huán)氧樹脂-半薄切片（1μm）-甲苯胺藍(lán)染色、聚丙烯酰胺凝膠電泳—western blot及間接免疫熒光等方法對脊髓后角的CGRP釋放、坐骨神經(jīng)... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ELISA法檢測AMG-517對脊髓背角CGRP釋放量的影響

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2.2 DRG 周圍注射 AMG-517 可降低 TRPV1 在 DRG 的表達(dá)通過 SDS-PAGE 及 western blot 檢測顯示：單純坐骨神經(jīng)損傷后 TRPV1 的表達(dá)顯著增加，尤以損傷后2周時表達(dá)最為顯著，幾乎是對照組的兩倍（圖2B，P <0.001）。當(dāng)采用 AMG-517 局部注射干預(yù)后（包括 1 周和 2 周組）DRG 內(nèi) TRPV1 的表達(dá)水平明顯下調(diào)，接近對照組（圖 2，P < 0.001）。 結(jié)果提示 AM-517 不僅阻斷 TRPV1的功能、干預(yù)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，同時，也可降低 DRG 的 TRPV1 的表達(dá)，使其功能進(jìn)一步被抑制。因此，于神經(jīng)損傷后局部給予 AMG-517 是一種行之有效的 TRPV1阻斷措施和手段。

圖 3 各組坐骨神經(jīng)橫斷面及軸突計數(shù)A：各組坐骨神經(jīng)橫斷面半薄切片-甲苯胺藍(lán)染色。B：各組坐骨神經(jīng)橫斷面有髓軸突計數(shù)及其統(tǒng)計學(xué)分析。#P<0.05,###P<0.001 與對照組相比；***P< 0.001, 與單純損傷組相比。 所示為軸突, Scale bar =10 μm。2.2 TRPV1 的功能阻斷可改善損傷后神經(jīng)內(nèi)的細(xì)胞反應(yīng)間質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)是坐骨神經(jīng)損傷后的另一個特征性表現(xiàn)。坐骨神經(jīng)損傷后 1 周時，損傷局部間質(zhì)內(nèi)細(xì)胞反應(yīng)非常顯著，尤其是采用 AMG-517 阻斷 TRPV1 功能后，細(xì)胞反應(yīng)更為明顯， 例如：單純損傷組的間質(zhì)內(nèi)細(xì)胞數(shù)目（Nkaryocyte）為 61 3，而AMG-517 用藥組的 Nkaryocyte為 85±3（150 μg/kg）和 112±5（AMG-517 300μg/kg）。形態(tài)學(xué)的特征提示：損傷后 1 周時各組神經(jīng)間質(zhì)內(nèi)的有核細(xì)胞多數(shù)為巨噬細(xì)胞（顯著的吞噬現(xiàn)象）；而于損傷后 2 周時，AMG-517 用藥組的細(xì)胞反應(yīng)明顯減輕，有

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Blockade of transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 promotes regeneration after sciatic nerve injury[J]. Fei Ren,Hong Zhang,Chao Qi,Mei-ling Gao,Hong Wang,Xia-qing Li.  Neural Regeneration Research. 2015(08)



本文編號：3466557