乳腺癌是威脅女性健康的最常見腫瘤之一,導(dǎo)致乳腺癌患者死亡的主要原因是腫瘤轉(zhuǎn)移。惡性腫瘤轉(zhuǎn)移涉及原發(fā)癌生長、腫瘤細(xì)胞脫落、侵入基質(zhì)或侵入脈管系統(tǒng)、形成癌栓、繼發(fā)組織器官定位生長等多個環(huán)節(jié)。三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）是一種高轉(zhuǎn)移性、侵襲性、復(fù)發(fā)性的乳腺癌型,大約10%²0%的乳腺癌病例屬于三陰性表型,因此,控制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是其治療的關(guān)鍵。激活素A（activin A,Act A）屬于轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factorβ,TGF-β）超家族成員,參與多種腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡及遷移調(diào)控。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),激活素A可以促進(jìn)體外培養(yǎng)人三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞遷移,但激活素A對三陰性乳腺癌在體內(nèi)生長及轉(zhuǎn)移的影響仍未闡明。因此,本研究選取小鼠三陰性乳腺癌細(xì)胞系4T1細(xì)胞,利用原位乳腺癌移植瘤模型鼠,探討激活素A對4T1細(xì)胞體外遷移及體內(nèi)轉(zhuǎn)移的影響,為進(jìn)一步尋找調(diào)控乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的治療靶點(diǎn)提供研究依據(jù)。一、研究方法1.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked im... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1細(xì)胞表達(dá)激活素AA.RT-PCR檢測ActivinβA、Smad2、Smad3、Smad4、ActRⅡA及ActRⅡBmRNA在4T1細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平；B.ELISA法檢測4T1細(xì)胞培養(yǎng)上清中激活素A蛋白水平（n=6）

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果21系4T1細(xì)胞24h和48h后，4T1細(xì)胞的活力均隨激活素A劑量的增加而增強(qiáng)（圖3.2），激活素A濃度為20ng/mL時，與培養(yǎng)液對照組比較差異顯著（p<0.01）。圖3.2激活素A促進(jìn)4T1細(xì)胞活力A.MTT法檢測4T1細(xì)胞在激活素A刺激24h后的細(xì)胞活力；B.MTT法檢測4T1細(xì)胞在激活素A刺激48h后的細(xì)胞活力。Control:單純培養(yǎng)液組；ACT1.25:激活素A1.25ng/mL；ACT5:激活素A5ng/mL；ACT20:激活素A20ng/mL。n=6，*p<0.05，**p<0.01。3.3激活素A對4T1細(xì)胞增殖的影響實(shí)驗(yàn)采用BrdU法檢測DNA復(fù)制活躍的細(xì)胞，探討激活素A對4T1細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果顯示，激活素A對4T1細(xì)胞增殖無明顯影響，p＞0.05（圖3.3A）；采用RTCA技術(shù)進(jìn)一步分析4T1細(xì)胞增殖，將4T1細(xì)胞加入E16xCELLigence板2h后，再加入激活素A（20ng/mL），每隔5min記錄細(xì)胞指數(shù)（CI），結(jié)果顯示，與單純培養(yǎng)液對照組相比，激活素A不影響4T1細(xì)胞的增殖，p＞0.05，無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖3.3B），該結(jié)果與BrdU法檢測4T1細(xì)胞增殖結(jié)果一致。

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果22圖3.3激活素A不影響4T1細(xì)胞增殖A.BrdU法檢測激活素A對4T1細(xì)胞增殖的影響；B.RTCA檢測激活素A對4T1細(xì)胞增殖的影響。Control:單純培養(yǎng)液組；ACT1.25:激活素A1.25ng/mL；ACT5:激活素A5ng/mL；ACT20:激活素A20ng/mL。n=6。3.4激活素A對4T1細(xì)胞凋亡的影響上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，激活素A可以促進(jìn)4T1細(xì)胞的細(xì)胞活力，但不影響其細(xì)胞增殖，因此，實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步采用AnnexinV-FITC和7-AAD雙染色，流式細(xì)胞術(shù)檢測激活素A預(yù)處理12h的4T1細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示，激活素A可以抑制4T1細(xì)胞凋亡，并且隨著激活素A濃度升高，對4T1細(xì)胞凋亡的抑制作用越明顯（圖3.4）。


本文編號：3452062