目的:研究骨肉瘤細胞Lnc RNA MALAT1的表達水平,探究Lnc RNA MALAT1通過HIF-1a及EZH2/β-catenin通路調(diào)控骨肉瘤發(fā)展的機制,以及通過下調(diào)MALAT1進而抑制骨肉瘤發(fā)展的可能性。方法:體外實驗,（1）我們采用MNNG/HOS骨肉瘤細胞株,RT-PCR檢測Lnc RNA MALAT1的表達。（2）通過siMALAT1,mTOR抑制劑雷帕霉素、激動劑MHY1485,HIF-1a抑制劑BAY87-2243,在常氧和CoCL₂模擬缺氧環(huán)境條件下,運用western blot、RT-PCR、ELISA等技術,檢測骨肉瘤細胞MALAT1、mTOR磷酸化、HIF-1a、VEGF-A、FGF2表達水平。采用前述多種干預條件下的骨肉瘤細胞培養(yǎng)基處理HMEC-1細胞,通過CCK8實驗、Transwell實驗、小管形成實驗,檢測HMEC-1細胞的增殖、遷移、成管能力,揭示該環(huán)路調(diào)控骨肉瘤細胞促血管新生的機制。（3）采用siMALAT1及GSK343抑制MALAT1及EZH2,通過CCK8實驗、Transwell實驗、流式細胞儀檢測兩者對骨肉瘤細胞增... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

LncRNAMALAT1/mTOR/HIF-1a環(huán)與骨肉瘤細胞（Fig1.MALAT1/mTOR/HIF-1aloopinOScells）

LncRNAMALAT1在骨肉瘤中的作用及調(diào)控機制研究42圖2.LncRNAMALAT1/mTOR/HIF-1a環(huán)與骨肉瘤細胞促血管化（Fig2.Pro-angiogenicactivityofMALAT1/mTOR/HIF-1aloopinOS）。（A）ELISA檢測低氧、siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243對骨肉瘤細胞分泌FGF2及VEGF-A的影響（B）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243處理的骨肉瘤細胞分泌物培養(yǎng)基對血管內(nèi)皮細胞AKT和ERK磷酸化的影響。（C）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243處理的骨肉瘤細胞分泌物培養(yǎng)基對血管內(nèi)皮細胞增殖活性的影響。（D）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243

LncRNAMALAT1在骨肉瘤中的作用及調(diào)控機制研究45圖3.siMALAT1通過抑制促血管效應抑制體內(nèi)骨肉瘤生長（Fig3.Anti-angiogeniceffectofsiMALAT1invivo）。（A）siMALAT1抑制異位骨肉瘤體積生長。（B）siMALAT1抑制異位骨肉瘤Ki67表達，提示siMALAT1顯著抑制骨肉瘤組織的細胞增殖。（C）siMALAT1促進異位骨肉瘤cleavedcaspase-3表達，提示siMALAT1促進骨肉瘤組織的細胞凋亡。（D）siMALAT1抑制異位骨肉瘤VEGF-A表達，提示siMALAT1抑制體內(nèi)骨肉瘤組織的促血管能力。（E）siMALAT1抑制異位

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Hypoxia inducible factor（HIF） in the tumor microenvironment:friend or foe?[J]. Yanqing Huang,Daniel Lin,Cullen M.Taniguchi.  Science China（Life Sciences）. 2017(10)



本文編號：3441874