目的:研究骨肉瘤細(xì)胞Lnc RNA MALAT1的表達(dá)水平,探究Lnc RNA MALAT1通過(guò)HIF-1a及EZH2/β-catenin通路調(diào)控骨肉瘤發(fā)展的機(jī)制,以及通過(guò)下調(diào)MALAT1進(jìn)而抑制骨肉瘤發(fā)展的可能性。方法:體外實(shí)驗(yàn),（1）我們采用MNNG/HOS骨肉瘤細(xì)胞株,RT-PCR檢測(cè)Lnc RNA MALAT1的表達(dá)。（2）通過(guò)siMALAT1,mTOR抑制劑雷帕霉素、激動(dòng)劑MHY1485,HIF-1a抑制劑BAY87-2243,在常氧和CoCL₂模擬缺氧環(huán)境條件下,運(yùn)用western blot、RT-PCR、ELISA等技術(shù),檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞MALAT1、mTOR磷酸化、HIF-1a、VEGF-A、FGF2表達(dá)水平。采用前述多種干預(yù)條件下的骨肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)基處理HMEC-1細(xì)胞,通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、小管形成實(shí)驗(yàn),檢測(cè)HMEC-1細(xì)胞的增殖、遷移、成管能力,揭示該環(huán)路調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞促血管新生的機(jī)制。（3）采用siMALAT1及GSK343抑制MALAT1及EZH2,通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩者對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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LncRNAMALAT1/mTOR/HIF-1a環(huán)與骨肉瘤細(xì)胞（Fig1.MALAT1/mTOR/HIF-1aloopinOScells）

LncRNAMALAT1在骨肉瘤中的作用及調(diào)控機(jī)制研究42圖2.LncRNAMALAT1/mTOR/HIF-1a環(huán)與骨肉瘤細(xì)胞促血管化（Fig2.Pro-angiogenicactivityofMALAT1/mTOR/HIF-1aloopinOS）。（A）ELISA檢測(cè)低氧、siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243對(duì)骨肉瘤細(xì)胞分泌FGF2及VEGF-A的影響（B）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243處理的骨肉瘤細(xì)胞分泌物培養(yǎng)基對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞AKT和ERK磷酸化的影響。（C）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243處理的骨肉瘤細(xì)胞分泌物培養(yǎng)基對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的影響。（D）siCtrl、siMALAT1、雷帕霉素、MHY1485與BAY87-2243

LncRNAMALAT1在骨肉瘤中的作用及調(diào)控機(jī)制研究45圖3.siMALAT1通過(guò)抑制促血管效應(yīng)抑制體內(nèi)骨肉瘤生長(zhǎng)（Fig3.Anti-angiogeniceffectofsiMALAT1invivo）。（A）siMALAT1抑制異位骨肉瘤體積生長(zhǎng)。（B）siMALAT1抑制異位骨肉瘤Ki67表達(dá)，提示siMALAT1顯著抑制骨肉瘤組織的細(xì)胞增殖。（C）siMALAT1促進(jìn)異位骨肉瘤cleavedcaspase-3表達(dá)，提示siMALAT1促進(jìn)骨肉瘤組織的細(xì)胞凋亡。（D）siMALAT1抑制異位骨肉瘤VEGF-A表達(dá)，提示siMALAT1抑制體內(nèi)骨肉瘤組織的促血管能力。（E）siMALAT1抑制異位

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hypoxia inducible factor（HIF） in the tumor microenvironment:friend or foe?[J]. Yanqing Huang,Daniel Lin,Cullen M.Taniguchi.  Science China（Life Sciences）. 2017(10)



本文編號(hào)：3441874