目的:檢測轉(zhuǎn)錄因子FOXO4在大鼠軟骨細胞中的表達,通過建立有效的軟骨細胞退變模型,探討FOXO4在大鼠軟骨細胞退變中的相關(guān)性。方法:（1）分別取4周與16周SD大鼠的股骨頭軟骨,采用Ⅱ型膠原酶分步消化法進行細胞分離培養(yǎng),以獲取正常及自然退變的原代軟骨細胞;（2）原代軟骨細胞在傳至第1代后,使用甲苯胺藍染色、阿利新藍染色及Ⅱ型膠原蛋白免疫細胞化學染色等方法進行細胞鑒定;（3）將實驗分為3組。對照組:取自4周齡大鼠的第2代軟骨細胞;自然退變組:取自16周齡大鼠的第2代軟骨細胞;誘導退變組:以終濃度10ng/mL1L-1β對4周齡大鼠軟骨細胞從第1代開始進行誘導退變處理,并在傳至第2代時繼續(xù)誘導后進行后續(xù)實驗;（4）顯微鏡下觀察細胞形態(tài)改變,并采用β-半乳糖苷酶染色法進行衰老檢測;（5）用RT-PCR分別檢測各組軟骨細胞中FOXO4和col2α的mRNA表達水平,Western Blot分別檢測各組軟骨細胞中FOXO4和Ⅱ型膠原蛋白表達水平。結(jié)果:（1）4周齡大鼠股骨頭軟骨與軟骨下骨結(jié)合較為松弛,易于完整取下,呈半透明狀,中部厚實,質(zhì)地韌而脆,易于切割;16周齡大鼠股骨頭軟骨與軟骨下骨結(jié)合... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SD大鼠股骨頭軟骨（A、B）4周齡大鼠；（C）16周齡大鼠

圖 2 原代大鼠軟骨細胞（A、B、C）：取自 4 周齡大鼠的軟骨細胞在 48h、4d、7d 時的顯微鏡下表現(xiàn)；（D、E）：取自 16 周齡大鼠的軟骨細胞在 7d 時的顯微鏡下表現(xiàn)

第1代軟骨細胞的形態(tài)學表現(xiàn)（A）顯微鏡；（B）甲苯胺藍染色；（C）阿利新藍染色；（D）Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3434202