第一部分利多卡因?qū)侨饬黾?xì)胞活性的影響及其機(jī)制研究目的:評(píng)估局麻藥利多卡因在體外對(duì)骨肉瘤細(xì)胞活性的影響及可能的凋亡途徑。方法:取生長狀態(tài)良好的人骨肉瘤細(xì)胞（HOS/MNNG,MG63,U2OS）,藥物處理前將細(xì)胞以每孔1*104個(gè)接種在96孔培養(yǎng)板中,24小時(shí)后,在培養(yǎng)板中加入含不同濃度的利多卡因的培養(yǎng)基,對(duì)照組加入相等容積的DEPC水,分別繼續(xù)培養(yǎng)24h,48h,72h后,用Cell Counting Kit-8（CCK-8）檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期,用JC-1法檢測(cè)線粒體膜電位的改變,并檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白和線粒體途徑關(guān)鍵蛋白的表達(dá)。結(jié)果:局麻藥利多卡因以時(shí)間依賴性和劑量依賴性的形式降低骨肉瘤細(xì)胞的活性,且4m M濃度的利多卡因較明顯,藥物處理細(xì)胞后,細(xì)胞周期停滯,線粒體膜電位下降,促凋亡蛋白BAX表達(dá)量增加,抑凋亡蛋白BCL-2表達(dá)量下降,線粒體途徑相關(guān)蛋白細(xì)胞色素C（Cyt-c）和Cleaved-Caspase 3,Caspase 9表達(dá)量也增加。結(jié)論:利多卡因?qū)侨饬黾?xì)胞的毒性作用具有明顯的劑量和時(shí)間依賴性,且通過線粒體凋亡途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。第二部分利多... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

利多卡因化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖

位于線粒體內(nèi)外膜之間，并與內(nèi)膜相連。當(dāng)細(xì)胞色素 C 被時(shí)放入細(xì)胞之后，會(huì)激活下游的 Caspas酶原，而活化的 Caspase-3 作為效應(yīng)因子，將作用于不同的下有靶點(diǎn)，最后經(jīng)蛋白質(zhì)的水解作用致細(xì)胞凋亡[31-34]。我們的研究結(jié)果也證實(shí)了利多卡因?qū)侨饬黾?xì)胞系的抗腫瘤特性，當(dāng)實(shí)驗(yàn)濃度達(dá)到 4mM 以時(shí)，利多卡因的對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性越來越明顯，且隨著藥物干預(yù)時(shí)間的延長，其毒性效果越來越強(qiáng)，其表現(xiàn)為細(xì)胞活性的下降，細(xì)胞周期的抑制，和凋亡細(xì)胞的增加，這都提示了利多因?qū)δ[瘤細(xì)胞毒性的劑量依賴性和時(shí)間依賴性。另外我們的結(jié)果還表明，利多卡因產(chǎn)生的細(xì)胞亡，其可能由線粒體途徑介導(dǎo)的凋亡有關(guān)，表現(xiàn)為細(xì)胞線粒體膜電位的下降，Cyt-C，CaspaseCleaved-Caspase 3 表達(dá)增加，蛋白 BAX/BCL-2 比例上升。根據(jù)以上假設(shè)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們推測(cè)在用利多卡因干預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞后，腫瘤細(xì)胞的線粒體膜電位下降，導(dǎo)致線粒體通透性增加，線�？障对黾樱俚蛲龅鞍缀� Cyt-c 釋放，激活 Caspase 9 激活，并隨之激活 Caspase 3，最終導(dǎo)致胞水解凋亡，但其中是否還存在其他機(jī)制還需進(jìn)一步研究。附 圖

不同濃度利多卡因?qū)?種骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文編號(hào)：3431766