發(fā)布時間：2021-10-10 23:45

　　目的:探究lncRNA IGFBP7-OT及其下游基因IGFBP7在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中的作用和分子機制。方法:用免疫組化和番紅O染色的方法對人正常軟骨組織和OA軟骨組織進行鑒定。用Real-time PCR的方法檢測lncRNA IGFBP7-OT和IGFBP7在OA軟骨組織中的表達情況。用免疫組化的方法檢測IGFBP7在OA軟骨組織中蛋白水平的表達。構(gòu)建lncRNA IGFBP7-OT和IGFBP7的表達質(zhì)粒,瞬時轉(zhuǎn)染分離自人正常軟骨組織的原代軟骨細胞,Real-time PCR和Western blot檢測表達效率。使用siRNA干擾內(nèi)源性IGFBP7表達,Western blot檢測敲低效率。CCK8實驗檢測轉(zhuǎn)染后原代軟骨細胞的增殖能力。流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后原代軟骨細胞的凋亡率。Western blot檢測細胞外基質(zhì)合成和分解代謝相關(guān)蛋白COL2A1,ACAN,MMP13和ADAMTS5以及凋亡相關(guān)蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl2和Survivin的表達情況。結(jié)果:與人正常軟骨組織相比,lncRNA IGFBP7-OT和IGFBP7在OA軟骨... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

LncRNAIGFBP7一OT在人OA軟骨組織中表達顯著上調(diào)

過表達lncRNAIGFBP7-OT促進細胞外基質(zhì)降解

264. LncRNAIGFBP7-OT 調(diào)控下游基因 IGFBP7 的表達為了探討 IGFBP7-OT 在 OA 發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮功能的分子機制，我們進行了生物信息學(xué)分析，從基因定位和序列比對兩個方面綜合考慮，確定 IGFBP7 為IGFBP7-OT 潛在的下游靶基因。LncRNA IGFBP7-OT 和 IGFBP7 均定位于 4q12（圖 4A），存在大段重疊序列（圖 4B）。在原代軟骨細胞中過表達 IGFBP7-OT后，上調(diào)了 IGFBP7 的蛋白表達（圖 4C）。以上結(jié)果表明，IGFBP7 的表達受IGFBP7-OT 調(diào)控，IGFBP7-OT 可能通過調(diào)控 IGFBP7 的表達而發(fā)揮其功能。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3429378