目的:（1）體外分離新生SD大鼠雪旺細(xì)胞并培養(yǎng),超速離心法提取雪旺細(xì)胞分泌的外泌體并進(jìn)行特異性蛋白鑒定。透射電鏡觀察雪旺細(xì)胞外泌體的粒徑和分布。（2）研究雪旺細(xì)胞外泌體對(duì)神經(jīng)元及雪旺細(xì)胞的生物學(xué)作用。觀察和研究透明質(zhì)酸凝膠緩釋外泌體的生物學(xué)特征參數(shù)。（3）探討透明質(zhì)酸水凝膠包裹緩釋雪旺細(xì)胞外泌體填充PCL神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)長(zhǎng)節(jié)段缺損的形態(tài)學(xué)和功能學(xué)效果。方法:（1）采用0.1%Ⅳ型膠原酶消化法提取原代大鼠雪旺細(xì)胞,并采用DMEM/F12完全培養(yǎng)基培養(yǎng)和純化。采用S100和Sox10進(jìn)行純度鑒定。采用CCK-8試劑盒對(duì)雪旺細(xì)胞的增殖狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。采用超高速離心法提取雪旺細(xì)胞分泌的外泌體,利用BCA試劑盒檢測(cè)外泌體中蛋白的含量。Western blot法對(duì)雪旺細(xì)胞分泌外泌體表面標(biāo)志物CD63、TSG101、CD9、Rab5和Na⁺/K⁺ATP酶進(jìn)行鑒定。（2）構(gòu)建1%濃度的透明質(zhì)酸水凝膠,并將雪旺細(xì)胞外泌體進(jìn)行包裹。體外放置于PBS中采用BCA試劑盒檢測(cè)外泌體的緩釋曲線。應(yīng)用雪旺細(xì)胞外泌體干預(yù)雪旺細(xì)胞和神經(jīng)元,CCK-8試劑盒檢測(cè)外泌體對(duì)雪... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

雪旺細(xì)胞形態(tài)（S-100標(biāo)記）

雪旺細(xì)胞體外貼壁特性

圖 1.3 雪旺細(xì)胞體外增殖活性.4 雪旺細(xì)胞 S-100 和 Sox-10 標(biāo)記鑒定 （綠色標(biāo)記：S-100，紅色標(biāo)Sox-10，藍(lán)色標(biāo)記：DAPI）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Decellularized sciatic nerve matrix as a biodegradable conduit for peripheral nerve regeneration[J]. Jongbae Choi,Jun Ho Kim,Ji Wook Jang,Hyun Jung Kim,Sung Hoon Choi,Sung Won Kwon.  Neural Regeneration Research. 2018(10)
[2]Autologous transplantation with fewer fibers repairs large peripheral nerve defects[J]. Jiu-xu Deng,Dian-yin Zhang,Ming Li,Jian Weng,Yu-hui Kou,Pei-xun Zhang,Na Han,Bo Chen,Xiao-feng Yin,Bao-guo Jiang.  Neural Regeneration Research. 2017(12)
[3]DC/CIKs細(xì)胞通過(guò)無(wú)miRNA的exosome蛋白刺激后能增強(qiáng)對(duì)胰腺癌細(xì)胞的免疫作用（英文）[J]. Ri-sheng QUE,Cheng LIN,Guo-ping DING,Zheng-rong WU,Li-ping CAO.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2016(05)



本文編號(hào)：3393584