研究背景BNIP3（Bcl-2 nineteen-kilodalton interacting protein 3）是一種單次跨膜的、僅含有非典型BH3結(jié)構(gòu)域的Bcl-2家族蛋白,主要分布于線粒體外膜上,是一種低氧反應蛋白。近年來的研究表明BNIP3參與多種細胞生存、凋亡、分化等生物學行為的調(diào)節(jié),在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、心肌損傷與修復、腦缺血缺氧性損害等多種疾病模型中見諸報道。我們先前的研究表明,低氧微環(huán)境可誘導小鼠皮膚角質(zhì)形成細胞BNIP3高表達,并對其遷移發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用。許多研究發(fā)現(xiàn)BNIP3對細胞自噬的調(diào)節(jié)作用,而自噬對細胞遷移的調(diào)控日益受到研究人員的關(guān)注。已有研究表明,BNIP3分布于人皮膚角質(zhì)形成細胞并對其穩(wěn)態(tài)及分化具有調(diào)節(jié)作用,BNIP3分布的區(qū)域可見自噬水平的上調(diào)。因此,我們推測BNIP3介導的自噬可能調(diào)節(jié)對角質(zhì)形成細胞的遷移,在創(chuàng)面再上皮化中發(fā)揮重要作用。自噬最初是基于其包裹細胞質(zhì)和細胞器的雙層膜超微結(jié)構(gòu)進行描述的,這種雙層膜結(jié)構(gòu)被稱為自噬體。該過程由兩種復合物的形成觸發(fā),即ULK1復合物和PIK3C3/VPS34復合物,其中含有Atg14L和Beclin 1。這些復合物位... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

創(chuàng)面愈合過程中創(chuàng)緣表皮層BNIP3及自噬水平的變化（免疫熒光）

36圖 3-1 低氧條件下角質(zhì)形成細胞自噬水平的變化（Western Blot 法）(A) HaCaT cells were exposed to hypoxia (2%) and incubated for the indicated times, and total proteinswere harvested for detection of autophagy markers (LC3, P62, Atg5, Atg7, Atg16L1, Beclin-1, andp-ULK1) via Western blotting. GAPDH was used as the loading control. (B-H) WB results werequantitatively analyzed. Data were shown as mean ± SEM (n = 5). *P < 0.05 versus Norm group.P62 是自噬降解的底物，作為接頭蛋白，將需要降解的胞內(nèi)成分轉(zhuǎn)移至自噬體內(nèi)。通常地，在自噬清除多泛素化蛋白時 P62 會被優(yōu)先降解。自噬過程中 LC3 和 P62 的表

陸軍軍醫(yī)大學博士學位論文 達也收到轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)。我們發(fā)現(xiàn)，低氧處理后角質(zhì)形成細胞中 P62 的表達顯著增加其增高可能是自噬降解的下降，或者 P62 從頭合成的增加所致。為了檢測這種增加是否受到轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)，我們使用轉(zhuǎn)錄抑制劑，放線菌素 D（ACTD），預處理角質(zhì)形成細胞結(jié)果表明（圖 3-2），無論是常氧還是低氧條件下，轉(zhuǎn)錄抑制劑 ACTD 均可顯著抑制 P6的表達，提示低氧條件下 P62 的表達受轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Autophagic activity in neuronal cell death[J]. Robert W.Button,Shouqing Luo,David C.Rubinsztein.  Neuroscience Bulletin. 2015(04)



本文編號：3345797